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Problème de mutagenèse par transposition



  1. #1
    CitizenBaban

    Unhappy Problème de mutagenèse par transposition

    Bonjour à tous.

    Voilà, je fais actuellement des mutagenèse par transposition. On insère pour cela une cassette tetracycline dans le Kr bactérien à l'aide du phage Lambda 1323 (Kleckner N., Bender J., Gottesman S. (1991) Methods in Enzymology 204, 139-179) incapable d'entrer en cycle lytique ou lysogénique. Ce phage contient une cassette Tet et une transposase mutée. Le problème est que lorsque je réalise des culture successives de E.coli 10054 (F-), le phage retourne en cycle lytique à partir de la seconde culture (soit environ 7 générations bactériennes). Le cycle lytique est normallement bloqué par un codon stop (mutation). Est-ce quelqu'un a une idée de la, ou des causses, rendant ce retour en cycle lytique possible, car ce n'est pa un phénomène isolé mais bien présent dans 90 à 100% de mes essais.
    Merci beaucoup

    -----


  2. #2
    Yoyo

    Re : Problème de mutagenèse par transposition

    Salut

    ta souche de Coli possede tres probablement un ARNt suppresseur de codon stop! Il faut que tu verifies son génotype, car il y a beaucoup de souches avec de tels suppresseurs.

    YOyo

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