Bonjour !
Comment on peut diférencier un géne pleiotrope et 2 génes fortement liés, en utilisant un simple protocol expérimental de la génétique moléculaire ( puisque c'est impossible de les différencier en génétique mandelienne)
ET MERCI D'AVANCE ...
Envoyé par mimita20
Si tu connais les 2 gènes suspects, il suffit d'en muter ou d'en isoler un.
oui, mais comment procéder exactement ??? et merci pour votre réponse
Salut
le plus simple est de les déléter un par un pour voir lequel confere le phénotype désiré.
YOyo
Yoyo, svp, pouvez vous m'expliquer d'avanatge la procédure que je peux suivre pour déléter un géne aprés l'autre ...
ca depend de l'organisme dont on parle, dans la levure c'est extrement facile, chez l'Homme impossible
Yoyo
Ok, si par exemple c'est chez la levure, on procéde comment sachant que je ne vais pas me mettre en pratique, c'est juste une question de cours(génétique moléculaire) dont je veux savoir la réponse ...ca depend de l'organisme dont on parle, dans la levure c'est extrement facile, chez l'Homme impossible
Par transposition: à l'aide d'un transposon, on interrompt un des deux gènes ce qui l'inactive. Pour les modalités de la technique, essaie les mots clés suivent "knock-out"
Oui c'est une technique mais difficile de cibler précisément l'integration d'un transposon!
En revanche la particularité de la levure est de faire 99% de recombinaison homologue. Il suffit donc d'amplifier par PCR un marqueur de selection (genre URA3, LEU2 etc...) avec des amorces dont les 20nt en 3' s'hybrident sur le marqueur de selection, mais dons les 50nt en 5' sont identiques au gene que l'on veut déléter.
Apres PCR on transforme directement les levures par le produit de PCR, qui va s'intégrer au locus par recombinaison homologue. On a donc cibler un gene specifique en le remplacant par un marqueur de selection.
Le tour est joué
YOyo
