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Extraction de l'ARN+ RT-PCR



  1. #1
    emi2008

    Extraction de l'ARN+ RT-PCR

    Bonsoir,

    Je suis nouvelle dans le domaine de la biologie moléculaire. Je vais faire l'extraction de l'ARN à partir des biopsies et des cellules pour faire par la suite une RT-PCR. Je n'arrive pas a choisir le Kit d'extraction d'ARN et de la RT-PCR. En se basant sur votre expérience pouvez vous me recommender les kit qui me permettent d'extraire mon ARN (en bonne qualité) et pour faire ensuite RT-PCR

    Je vous remercie pour votre aide

    Emi2008

    -----


  2. Publicité
  3. #2
    MaliciaR

    Re : Extraction de l'ARN+ RT-PCR

    Salut,

    Tu as le RNeasy chez Qiagen, tu peux regarder la liste de kits disponibles ici :
    http://www1.qiagen.com/Products/RnaS...anSamples.aspx

    Sinon, pour la RT-PCR, tu peux utiliser des kits de chez Qiagen aussi (One step).

    Mais pourquoi c'est à toi de choisir les kits?

    Cordialement,
    An expert is one who knows more and more about less and less.

  4. #3
    gorben

    Re : Extraction de l'ARN+ RT-PCR

    Salut,

    J'utilise le kit RNA miniprep de stratagen. Il est tres bien et tres rapide. Par contre pour la RT-PCR je remplace le traitement a la DNase du kit par un traitement a la turbo DNA free d'AMBION (apres inactivation de l'enzyme via le kit ambion, je recupere le protocole stratagen).

    Les rendements sont tres bons et la purete parfaite (pour de l'extraction de l'ARN bacterien).

    A+

  5. #4
    jmbowie

    Re : Extraction de l'ARN+ RT-PCR

    Je connais quelqu'un qui utilisait le kit de MP (ex-Qbiogen) Pro RNA avec la machine FastPrep, réputée pour sa grande efficacité dans la lyse des tissus les plus robustes, pour obtenir des ARN de cellules de poumons et autres tissus humains. Les ARN obtenus sont de bonne qualité (Confirmé par analyse Agilent) et en bonne concentration, les protocoles rapides (moins qu'une colonne par contre) et on peut faire des analyses transcriptionelles précises derrières.
    Avant de lancer la PCR temps réel, sois bien sûr qu'il ne reste plus du tout d'ADN génomique dans ta prép.

    Bon courage
    Blast up your life!

  6. #5
    Galice

    Re : Extraction de l'ARN+ RT-PCR

    Bonjour,

    Jusqu'à maintenant, j'ai pu testé l'extraction d'ARN (à partir de cellules humaines) avec les kits :
    - Trizol reagent
    - Ademtech (Total RNA Isolation Reagent)
    - Qiagen RNeasy

    Je dirais que les colonnes Qiagen permettent d'avoir un ARN pur mais pas en grand quantité.
    Le Trizol permet d'avoir bcp plus d'ARN, mais la pureté n'est pas toujours idéale, notamment pour faire ensuite une RT-PCR .
    Le kit Ademtech a été pour moi un bon compromis entre quantité et qualité d'ARN.

    Salut.

  7. A voir en vidéo sur Futura

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