Bonsoir,
Je suis nouvelle dans le domaine de la biologie moléculaire. Je vais faire l'extraction de l'ARN à partir des biopsies et des cellules pour faire par la suite une RT-PCR. Je n'arrive pas a choisir le Kit d'extraction d'ARN et de la RT-PCR. En se basant sur votre expérience pouvez vous me recommender les kit qui me permettent d'extraire mon ARN (en bonne qualité) et pour faire ensuite RT-PCR
Je vous remercie pour votre aide
Emi2008
Salut,
Tu as le RNeasy chez Qiagen, tu peux regarder la liste de kits disponibles ici :
http://www1.qiagen.com/Products/RnaS...anSamples.aspx
Sinon, pour la RT-PCR, tu peux utiliser des kits de chez Qiagen aussi (One step).
Mais pourquoi c'est à toi de choisir les kits?
Cordialement,
Salut,
J'utilise le kit RNA miniprep de stratagen. Il est tres bien et tres rapide. Par contre pour la RT-PCR je remplace le traitement a la DNase du kit par un traitement a la turbo DNA free d'AMBION (apres inactivation de l'enzyme via le kit ambion, je recupere le protocole stratagen).
Les rendements sont tres bons et la purete parfaite (pour de l'extraction de l'ARN bacterien).
A+
Je connais quelqu'un qui utilisait le kit de MP (ex-Qbiogen) Pro RNA avec la machine FastPrep, réputée pour sa grande efficacité dans la lyse des tissus les plus robustes, pour obtenir des ARN de cellules de poumons et autres tissus humains. Les ARN obtenus sont de bonne qualité (Confirmé par analyse Agilent) et en bonne concentration, les protocoles rapides (moins qu'une colonne par contre) et on peut faire des analyses transcriptionelles précises derrières.
Avant de lancer la PCR temps réel, sois bien sûr qu'il ne reste plus du tout d'ADN génomique dans ta prép.
Bon courage
Bonjour,
Jusqu'à maintenant, j'ai pu testé l'extraction d'ARN (à partir de cellules humaines) avec les kits :
- Trizol reagent
- Ademtech (Total RNA Isolation Reagent)
- Qiagen RNeasy
Je dirais que les colonnes Qiagen permettent d'avoir un ARN pur mais pas en grand quantité.
Le Trizol permet d'avoir bcp plus d'ARN, mais la pureté n'est pas toujours idéale, notamment pour faire ensuite une RT-PCR .
Le kit Ademtech a été pour moi un bon compromis entre quantité et qualité d'ARN.
Salut.
