Bonjour !
Comment peut-on exprimer une proéteine d'un géne humain dans E.coli ??? (j'ai trouvé dans des sites qu'il faut cnstruire un ADNc)et comment on peut l'avoir aprés ???(par criblage immunologique non ???
???) c'est ce que j'ai pu trouver mais en gros j'ai pas compris exactement la démarche.
MERCI DE M'ECLAIRCIR LE SUJET ....
Oui en gros c'est ça,
Tu pars d'ADN complémentaire, (pour avoir de l'ADNc, tu prends l'ARNm ne contenant plus d'introns de ton EUC, et puis grâce à une transcriptase reverse, l'ARNm est recopié en ADNc, qui ensuite peut eventuellement devenir ADN db)
Ensuite, tu l'insert dans un plasmide, possédant une origine de réplication E.Coli, avec un gène de sélection (ex.: Résistance à lampiciline)
La bactérie va commencer à produire ta protéine
Mais, tu va devoir modifier ton transcrit d'ADN c de départ pour par exemple utiliser les ARNt que la bactérie utilise le plus souvent, et aussi , tu peux, par PCR, ajouter une séquence à ton plasmide permettant de secréter la protéine dans l'espace périplasmique ou extracellulaire ..
Je sais pas si j'ai été plus clair,mais en ce moment j'étudie le même cours que toi
En gros, c'est ça...
Mais il y a des points très importants à prendre en compte, par exemple le fait qu'E.coli est un procaryote, ce qui n'est pas le cas de l'Humain, donc il vaut mieux être sûr que le procaryote pourra produire une protéine fonctionnelle... Parce que tu peux bien essayer de la produire, mais ensuite? Tu ne fais pas une production d'une protéine en grosses quantités juste pour la petite gym du matin, mais tu le fais en général pour l'étudier. Donc, est-ce que ce modèle d'étude est un modèle adéquat, cela reste à vérifier.
Vous êtes en quelle année, mimita et azzurela?
Cordialement,
Je suis en 3e Bac Biotechnologie (et oui ...dernière année ...dernier blocus)
Dailleurs, je rajouterai aussi que si ton but est la production de protéines, les procaryotes c'est pas tip top car ils ne vont pas faire les modifications pos traductionnelles nécessaires, donc tu peux essayer de produire la protéine dans une cellule de levure, mais les modif' post-trad n'y sont quand meme pas géniales.
Au fait, saurais tu me dire ce qui doit se trouver impérativement dans un plasmide destiné aux cellules de mammifaires ?
C'est ce dont je parlais justement. Et puis faut penser aux corps d'inclusion...Envoyé par azzurela
Tu poses la question à qui, en fait?Au fait, saurais tu me dire ce qui doit se trouver impérativement dans un plasmide destiné aux cellules de mammifaires ?
Cordialement,
il n'y a pas de plasmide replicatif pour les cellules de mammiferes. Au moins tu fais de l'expression transitoire, sinon tu utilises des vecteurs viraux.
Yoyo
A propos des corps d'inclusion, j'ai ecrit dans mon cours que pour les éviter il fallait diminuer le taux d'expression des protéines, et ensuite j'ai noté qu'il fallait augment la synthèse des protéines subissant un remodelage avec les protéines chaperons.
Ces deux phrases me semblent contraires, est ce que je me suis plantée ???
OK, merci pour votre aide, et le truc de criblage immunologique, on procéde comment ???
en effet il faut abaisser la temperature de croissance des bacteries pour diminuer le taux d'expression et donc le risque d'avoir des corps d'inclusion.A propos des corps d'inclusion, j'ai ecrit dans mon cours que pour les éviter il fallait diminuer le taux d'expression des protéines, et ensuite j'ai noté qu'il fallait augment la synthèse des protéines subissant un remodelage avec les protéines chaperons.
Ces deux phrases me semblent contraires, est ce que je me suis plantée ???
Sinon si tu surexprimes les proteines chaperonnes alors tu aides les proteines a se conformer correctement.
YOyo
Mmmmmhh ... pas con du tout Yoyo
Merci pour ton aide
Par contre, je ne sais pas ce que c'est le criblage immunologique, désolée mimita
Bonne soirée à vous tous
