surexpression d'une protéine dans E.coli

[invite0b6be990]

salu à tous
je suis en train d'essayer de surexprimer une protéine dans E.coli, et elle me pose beaucoup de problème. l'expression de la protéine en question est induite par l'addition d'IPTG dans le milieux de culture (milieux LB). et j'arive à la produire, le problème est que ma protéine qui devrait être soluble, je ne la retrouve plus dans les protéines solubles mais dans le culot après sonication des bactéries.
je ne sais pas trop quoi faire. avez vous des suggetions?
merci d'avance
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[gorben]

Salut,
ta proteine se retrouve dans des corps d'inclusions. Fais ton induction par l'IPTG à differentes temperatures (30, 25 ou 20°). le metabolisme de la bacterie sera reduit, et cela laissera plus de temps à ta proteine pour etre repliée.

A+

[Svenn]

Sans induction par l'IPTG, ta proteine est soluble ou non ?

[Yoyo]

Salut

Classique lors de la surexpression... la proteine s'aggrege et se retrouve insoluble! Comme précisé plus haut, tu peux essayer plusieurs temperatures d'induction, mais tu peux aussi essayer un temps d'induction moins long (3h suffisent en general), ou alors changer de souches de coli parfois ca change tout.
Yoyo

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite0b6be990]

Sans induction par l'IPTG, ta proteine est soluble ou non ?

salut
merci pour vos reponses.
je ne comprend pas ce que tu veux dire Svenn, sans induction à l'IPTG je n'ai pas de protéine du tout.