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surexpression d'une protéine dans E.coli



  1. #1
    kani07

    Smile surexpression d'une protéine dans E.coli

    salu à tous
    je suis en train d'essayer de surexprimer une protéine dans E.coli, et elle me pose beaucoup de problème. l'expression de la protéine en question est induite par l'addition d'IPTG dans le milieux de culture (milieux LB). et j'arive à la produire, le problème est que ma protéine qui devrait être soluble, je ne la retrouve plus dans les protéines solubles mais dans le culot après sonication des bactéries.
    je ne sais pas trop quoi faire. avez vous des suggetions?
    merci d'avance

    -----


  2. Publicité
  3. #2
    gorben

    Re : surexpression d'une protéine dans E.coli

    Salut,
    ta proteine se retrouve dans des corps d'inclusions. Fais ton induction par l'IPTG à differentes temperatures (30, 25 ou 20°). le metabolisme de la bacterie sera reduit, et cela laissera plus de temps à ta proteine pour etre repliée.

    A+

  4. #3
    Svenn

    Re : surexpression d'une protéine dans E.coli

    Sans induction par l'IPTG, ta proteine est soluble ou non ?

  5. #4
    Yoyo

    Re : surexpression d'une protéine dans E.coli

    Salut

    Classique lors de la surexpression... la proteine s'aggrege et se retrouve insoluble! Comme précisé plus haut, tu peux essayer plusieurs temperatures d'induction, mais tu peux aussi essayer un temps d'induction moins long (3h suffisent en general), ou alors changer de souches de coli parfois ca change tout.
    Yoyo

  6. #5
    kani07

    Re : surexpression d'une protéine dans E.coli

    Citation Envoyé par Svenn Voir le message
    Sans induction par l'IPTG, ta proteine est soluble ou non ?
    salut
    merci pour vos reponses.
    je ne comprend pas ce que tu veux dire Svenn, sans induction à l'IPTG je n'ai pas de protéine du tout.

  7. A voir en vidéo sur Futura

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