doxycycline tet-off en transitoire ?

[invite85934679]

Salut tout le monde,

Je dois tester en transitoire deux plasmides avec un gène sous le contrôle d'un promoteur inductible (TRE) dans une lignée tet-off avant d'effectuer des clones stables.

Ces cellules sont en présence ou absence de dox pour avoir des contrôles depuis plusieurs jours, cependant, ma question est :

Lors d'une transfection avec la lipofectamine, on ne met pas de PSN (antibiotiques) dans le milieu, que l'on remplace 3h après par du milieu avec antibios... Mais doit-on mettre de la doxycycline pour empecher l'expression ? Est-ce toxique pour la cellule à très faible dose (100ng/ml) ou mieux vaut-il que je n'en mette pas durant les 3 heures... J'ai peur que durant ce temps, les cellules qui ne devraient pas exprimer expriment un peu...

Merci pour vos idées !

FX
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[invited07f1424]

Salut,
Si tu veux, tu peux traiter tes cellules avec de la dox avant la transfection et tu fait la transfection dans la dox. La dox est très difficile à évacuer des cellules. Il faut plusieurs jours pour n'avoir plus de dox dans les cellules. Alors 3 heures sans, tu ne risques rien. Le dox colle partout sur les parois, il te faudra passer tes cellules pour vraiment enlever tout.
Pour moi la dox n'est pas toxique et j'ai dèja fait des centaines de transfections en présence de dox.
Tiens nous au courant.
Benjamin