Sequence d'une amorce pour PCR

[invite58366cc2]

Bonjour,
Je fais actuellement un stage et je ne comprends pas la séquence de mon amorce pour la PCR, pouvez vous m'aider?
Voici la séquence de mon amorce: 5? CTC GTC CTC GAG TTA ATG GTG GTG ATG GTG GTG GCC GGA GCC GCG GGG CAC CAG CTC TGT GGC GTG GGA GGC-3?
Sachant que les 6 derniers codons se fixeront sur l'ADN
Il y a 6 codons pour l'histidine, avec 2 sortes de codons pour l'ARNt, pour ne pas qu'il soit "saturé".
Je sais qu'il y a aussi un codon stop et si je ne me trompe pas les codons apres le codon stop servent à maintenir l'ARN polymerase (oui ou non????).
Ma question est pourquoi il y a t-il 7 acides aminés entre les codons qui vont se lier à l'ADN et les 6 His? A t'on choisi des acides aminés particuliers pour l'après codon stop?
Merci à ceux qui me répondront!

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[invite160a5434]

Je n'ai pas de code génétique sous la main pour voir à quoi correspond ces codons, mais je dirais que ton expérience ressemble très fortement a une mutagénèse dirigée avec insertion d'une séquence particulière grace a la PCR.

L'étiquette histidine est souvent, quant à elle, utilisé pour faire des banques génomiques et de retrouver un fragment particulier.

Il faut voir aussi si les codons introduits ne correspondent pas a un site de restriction pour ensuite introduire ton fragment PCR dans un vecteur.

[piwi]

Le but de ta PCR ne serait il pas de produire ta protéine taguée et d'étudier ses interactions avec d'autres protéines?
Le but du linker est de maintenir une certaine souplesse dans le lien entre tes histidines fixées et ta protéine afin qu'elle puisse bouger et fixer convenablement d'éventuels interactants.

5' CTC GTC CTC GAG TTA ATG GTG GTG ATG GTG GTG GCC GGA GCC GCG GGG CAC CAG CTC TGT GGC GTG GGA GGC-3'

Il y a là un site XhoI pour permettre un clonage.
J'imagine que ton oligo antisens doit aussi porter un site de restriction

Les 6 autres nucléotides sont classiquement ajoutés pour permettre à l'enzyme de restriction de couper (ce sont des endonucléases).

Cordialement,
piwi

[MaliciaR]

Pour pas répéter ce qui a déjà été dit, je vais juste rajouter que sans regarder à quelle séquence tes oligos vont s'hybrider, il est de l'ordre du divinatoire de te donner des indications supplémentaires

Cordialement,

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite8a80b784]

Voilà demain j'ai examen de bio mol et un exo sur PCR va tombé en temps normal je m'en sort mais là il y une boite tata -10 et une boite -35 qui me gène


pourriez vous me résoudre l'exercice ce serai hyper cool je suis trop en galère



Merci à vous