Production protéine ?

[invite9ede8c9d]

Bonjour,

juste une petite question pour savoir si je continue la manip ou pas..

J'ai lancé une production de protéine en Ecoli, j'ai donc lancé une préculture hier soir. Ce matin j'ai lancé la culture atteint un Do = 0.8 . J'ai divisé la culture en deux:

- une induite qui est à 30°C durant 4°
- et une autre à 4°C pour lancé l'induction ce soir pour faire une production ON à 25 °C..

Est ce génant qu'elle soit à 4 °C ?? Faut il que je lance la production direct lorsque la DO est atteinte ??

Merci
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[invite17a570c1]

Salut,

Je t'avoue ne pas trop comprendre ton protocole...

J'ai lancé une production de protéine en Ecoli, j'ai donc lancé une préculture hier soir. Ce matin j'ai lancé la culture atteint un Do = 0.8 . J'ai divisé la culture en deux:

- une induite qui est à 30°C durant 4°

Tu parles de 4 heures ici, on est d'accord?

- et une autre à 4°C pour lancé l'induction ce soir pour faire une production ON à 25 °C..

Est ce génant qu'elle soit à 4 °C ?? Faut il que je lance la production direct lorsque la DO est atteinte ??

Merci

Je ne comprends pas pourquoi tu l'as laissée à 4°C pendant une journée au lieu de la lancer tout de suite à 25°C
Je ne connais pas ta protéine, mais je sais que DO 0,8 n'est pas encore une phase stationnaire pour E. coli. Ce qui signifie que le promoteur contrôlant l'expression du gène qui code ta protéine (on y arrive, on y arrive ) est encore un peu actif et il y a donc une petite production de la protéine en question. Je sais que ça m'avait pris la tête l'année dernière lorsque la protéine que ja voulais obtenir s'est révélée toxique pour les bactos et les a trucidées
Aussi, laisser les bactéries longtemps en phase stationnaire-like n'est pas super : elles pigent qu'elles doivent se serrer la ceinture et des protéines qui ne servent à rien (donc, ta protéine d'intérêt ) leur sert de stock d'aa...

Donc, à voir De toute façon, tu as déjà ta culture, lance-la, tu verras bien

Cordialement,