[Biologie Moléculaire] Extraction ARN
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Extraction ARN



  1. #1
    invite90ce6516

    Extraction ARN


    ------

    bonjour je dois préparer une extraction D'ARN de levure, j'aurai besoin de confirmation:
    -après avoir delayé mes levure fraiche dans de l'eau distillé j'y ajour de la soude a 10mol/L, es ce pour faire eclater les membranes?
    -ensuite on ramene se mélange a PH acide(4,5) es ce pour detruire l'ADN?
    -on le met ensuite dans la glace mais la je ne vois pas pourquoi

    -----

  2. #2
    invite90ce6516

    extraction ARN

    SVP à l'aide

  3. #3
    invite17a570c1

    Re : extraction ARN

    Bonsoir,

    Pourriez-vous être un peu patiente? Vous exigez une réponse dans les 7 min suivant votre demande et en plus vous envoyez des MP aux intervenants avec demande de vous faire aider en privé, ce qui est totalement contraire à la Charte de FSG que vous avez signée en vous y inscrivant...

    Merci de prendre en compte le fait que les intervenants ne participent que s'ils ont le temps/envie et ce n'est pas parce que c'est urgent pour vous que ça l'est pour nous.

    Cordialement,

  4. #4
    invitec9f0f895

    Re : Extraction ARN

    Citation Envoyé par soileil Voir le message
    bonjour je dois préparer une extraction D'ARN de levure, j'aurai besoin de confirmation:
    -après avoir delayé mes levure fraiche dans de l'eau distillé j'y ajour de la soude a 10mol/L, es ce pour faire eclater les membranes?
    -ensuite on ramene se mélange a PH acide(4,5) es ce pour detruire l'ADN?
    -on le met ensuite dans la glace mais la je ne vois pas pourquoi
    Globalement tu as les réponses a tes question. L'etape dans la glace permet de préserver (en theorie) tes ARN de la degradation.
    Bon il y a des protocoles plus propres et plus efficaces

    YOyo

  5. A voir en vidéo sur Futura
  6. #5
    invite90ce6516

    Re : Extraction ARN

    Merci beaucoup pour cette réponse. j'en ai encore une petite.
    Après ces étapes on fait une centrifugation à 3000 tours, Les ARN sont dans le surnagent (de volume V) c'est pourquoi on le récupère. Mais on y ajoute un volume V d'éthanol à 95%, es ce pour faire précipité les ARN dans le culot? je pense que oui puisqu'on le récupère.
    Mais dans l'étape suivante, après une nouvelle centrifugation à 3000 tours, on remet de l'éthanol. La je ne vois pas pourquoi.

  7. #6
    invite8c0cc995

    Re : Extraction ARN

    En général les acides nucléiques précipitent en présence de sel. En général on remet de l'EtOH à 70% pour éliminer une partie des sels et des autres contaminants (on parle souvent de lavage du culot).

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