bonjour je dois préparer une extraction D'ARN de levure, j'aurai besoin de confirmation:
-après avoir delayé mes levure fraiche dans de l'eau distillé j'y ajour de la soude a 10mol/L, es ce pour faire eclater les membranes?
-ensuite on ramene se mélange a PH acide(4,5) es ce pour detruire l'ADN?
-on le met ensuite dans la glace mais la je ne vois pas pourquoi
SVP à l'aide
Bonsoir,
Pourriez-vous être un peu patiente? Vous exigez une réponse dans les 7 min suivant votre demande et en plus vous envoyez des MP aux intervenants avec demande de vous faire aider en privé, ce qui est totalement contraire à la Charte de FSG que vous avez signée en vous y inscrivant...
Merci de prendre en compte le fait que les intervenants ne participent que s'ils ont le temps/envie et ce n'est pas parce que c'est urgent pour vous que ça l'est pour nous.
Cordialement,
Globalement tu as les réponses a tes question. L'etape dans la glace permet de préserver (en theorie) tes ARN de la degradation.Envoyé par soileil
Bon il y a des protocoles plus propres et plus efficaces
YOyo
Merci beaucoup pour cette réponse. j'en ai encore une petite.
Après ces étapes on fait une centrifugation à 3000 tours, Les ARN sont dans le surnagent (de volume V) c'est pourquoi on le récupère. Mais on y ajoute un volume V d'éthanol à 95%, es ce pour faire précipité les ARN dans le culot? je pense que oui puisqu'on le récupère.
Mais dans l'étape suivante, après une nouvelle centrifugation à 3000 tours, on remet de l'éthanol. La je ne vois pas pourquoi.
En général les acides nucléiques précipitent en présence de sel. En général on remet de l'EtOH à 70% pour éliminer une partie des sels et des autres contaminants (on parle souvent de lavage du culot).
