bonjour je dois préparer un extraction d'ARN de levures.
Es ce quand on est a PH acide ou à PH basique que l'on élimine l'ADN? JE sais que l'ADN est de charge négative donc je suppose que c'est quand on est a PH acide mais dans mon protocole, on m'indique qu'il faut tout d'abord mettre de la soude à 10 mol/L, es ce pour rompre les liaisons de la membrane de la levure?
hey!!!
la soude doit jouer le rôle de detergent pour détruire la membrane mais on doit un peu l'aider ( broyer ) on doit ajouter le tampon avec... apres ca doit etre la centrifugation différentielle pour séparer adn de arn et le tour est joué^^
"le campbell est ton ami, mais un mauvais oreiller..."
dans mon cas la centrifugation intervient après le passage pas l'abaissement de ph puis de température. on récupere alors le surnagent, le culot contenant tout les detritus des levure frache si je ne me trompe pas. Et après es ce l'alcool à 95% qui permet une centrifugation ou juste parce que la centrifugation n'est qu'a 3000 tours
oui d'abord il faut détruire les mbranes, le cytosol et le contenu du noyau vont donc se mélanger, la c'est au tour du dénaturant de faire effet , il doit y avoir qqchose en plus du tampon genre SDS.
l'alcool sert pour la centri ( pas tres rapide 3.000 RPM) l'alcool permet de faire 'culoter une grande partie des protéines ( je n'en suis plus tres sur je suis entrain de me battre ac la glycélie pour le moment :s) mais le principe y est
"le campbell est ton ami, mais un mauvais oreiller..."
ok pour la soude elle détruit les membranes. Mais ensuite nous procedons à un abaissement du ph jusqu'a 4,5. Es ce pour eradiqué l'ADN? nos pas de SDS juste ce que j'ai pu dire plus haut
