Bonjour
j'aurais une question concernant la division cellulaire dans une culture de cellules HEK. Ces cellules en temps normal se multiplient bien et je voudrais stopper cette multiplication le temps de l'utilisation d'antisens... Je compte sur un arrêt pendant 4 jours : j'ai essayé le serum décomplémenté (60°C pendant 1h) mais sans effet (les cellules continuent à pousser) QQ'un connaitrait un moyen de stopper la prolifération ?
Merci
E
Et en baissant la température de l'incubateur?
Je sers la science et c'est ma joie.... Il parait.
1h de cellules décomplémenté ne suffit pas pour synchroniser les cellules.
Je ne connais pas les HEK, mais voila quelques pistes que j'utilisais pour réduire la croissance de mes cellules et les synchroniser sans utiliser de drogue :
- utilisation de sérum décomplémenté (pendant toute la manip)
- baisser la quantité de sérum (5%, voire 1-2% selon la resistance des cellules)
- les 2 précédentes, c'est à dire 1-2% de sérum décomplémenté pendant 16H.
Mais il faut bien suivre les cellules au microscope car certaines lignées sont très sensibles à la baisse de sérum et partent vite en apoptose, alors que d'autres peuvent resister 16-24h sans sérum !
Mais à mon humble avis, je ne pense pas qu'une cellule en culture supporte d'être à l'arrêt pendant 4 jours.
oui en fait j'ai déjà essayé de faire du sérum décomplementé sur les cellules sur 3 jours. D'habitude j'utilise du bovine growth serum (BGS) car moins cher que le FBS (foetal bovin serum) : cette fois j'ai éssayé BGS, FBS et aussi HIHS (horse serum heated), tous trois chauffés pd 1h à 60°C... et en parallèle à du BGS normal (non chauffé)
J'avoue que je n'ai pas vu de différence de pousse, je dirais même que le FBS même décomplémenté est meilleur que le BGS normal.
Bref, peut-etre effectivement du côté de la temperature ?
Vous pensez qu'au delà de 2 ou 3 jours, ça risque de tuer les cellules si elles ne se divisent pas ?
Ma première réaction a été de me dire que si l'on faisait suer à venir spliter nos cellules même par temps de pluie c'est que l'on ne pouvait pas stoper le processus de division facilement. Sinon tout le monde le ferait.
Maintenant je me dis qu'en baissant la température de l'incubateur on doit pouvoir au moins ralentir la division cellulaire. Reste que je ne pense pas que cela soit très bon. Les cellules n'aiment pas trop les éléments stressants.
Ensuite je crois qu'il faut quand même avoir en tête en qu'en baissant la température c'est tout le métabolisme cellulaire que l'on risque de perturber. Donc même si les cellules ne se divisent plus, ne risque-t-on pas d'induire un biais dans les manip'?
Cordialement,
piwi
Je sers la science et c'est ma joie.... Il parait.
ouais peut-être pour le biais mais ce sera le même que pour mon contrôle puisque je suivrais le même protocole dans les deux cas... La seule question c'est jusqu'a combien de degres descendre pour avoir des cellules qui restent quand même en forme ?
Ca doit vraiment dépendre des cellules. Là y a pas d'autres moyens que de faire des tests. Tu peux peut être commencer à 35°C et descendre progressivement.
Je sers la science et c'est ma joie.... Il parait.
et du coté chimique, rien comme produit pour inhiber la division ?
sait jamais....
un cytostatique type colcichine ou nocodazole?
A mon avis ce sera toxique pour tes cellules.
Tiens t'as quelques exemples ici: http://forums.futura-sciences.com/sh...ad.php?p=73310
Cordialement,
piwi
Je sers la science et c'est ma joie.... Il parait.
bonjour,
je confirme que le nocodazole va entre autres desintegre les microtubules donc ca peut etre genant.
sinon une quesiton par rapport a ce que Teve21 veut faire.
Au lieu d'antisens, as tu pense aux siRNA.
ca marche tres bien en transfection transitoire/stables.
toll
ben moi ce que je fais quand je veux arreter mes cellule c'est que je les depletes totallement en serum pendant 30h et sa marche vraiment tres bien.
En fait j'ai effectivement essayer sans sérum et les cellules stoppent leur croissance. Par curiosité, j'ai laissé trainer plus d'une semaine et elles ont supporté : pas ou peu de division cellulaire, certainement de la mort cellulaire mais c'est difficile à quantfier. Par contre il restait suffisament de cellules apres 3 ou 4 jours pour faire la manip d'antisens.
Merci pour les conseils, je suis bien content de ne pas m'être embarqué dans cette approche de descendre la température car ça avait l'air fastidieux...!
Ah oui et puis en plus j'ai remis du serum après la semaine "sans sérum" et les cellules ont très bien repris. Comme quoi, je pense qu'elles ne sont pas si mal que cela
je veux savoire si on peut isoler une cellule humaine et si non dit moi pourquoi? et merci d'avance
Envoyé par futura_dr
Bonjour Et bienvenue sur Futura-Sciences,
votre demande n'a pas de rapport avec la question de ce fil de discussion. Je vous invite à créer votre propre discussion, tout en profitant pour lire les points 2 et 13 de la charte :
2. La courtoisie est de rigueur sur ce forum : pour une demande de renseignements bonjour et merci devraient être des automatismes. Vous pouvez critiquer les idées, mais pas les personnes.Bonne journée13. Respectez les lecteurs du forum, n'écrivez pas vos messages en style SMS ou phonétique. Utilisez la fonction "prévisualisation" pour vous relire et limiter les fautes d'orthographe. Evitez les majuscules pour attirer l'attention des lecteurs
