Extraction proteine nucleaire nematode

[invitebf4fc140]

Bonjour ,

Je voudrais extraire une proteine nucleaire (ds le noyau cellulaire) a partir de C.elegans.
Quelqu'un aurait il un protocole svp??
Merci d'avance
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[invite43dd87ea]

Peux-tu nous en dire plus sur cette proteine? Est elle tissus spécifique, ubiquitaire?
Que sais tu sur elle?

[invitebf4fc140]

La proteine est ubiquitaire et c'est un facteur de transcription...
Je sais lyser les cellules pr récupérer les noyaux.
Et comment faire pour extraire ma proteine du noyau?
Merci

[invite43dd87ea]

Si c'est un facteur de transcription tu as différentes solution, soit tu fais un ChIP mais il te faut un anticorps contre ta protéine d'intérêt.

Sinon tu peux taggé ta proteine mais ca va te prendre du temps, si tu as la séquence tu fais un histidine tag ou une fusion avec la gst et tu isole sur colonne d'affinité. Mais pour ca va falloir faire des constructions, les microinjecter, et avoir des vers transgéniques... aaprès pour être sur que t'as proteine soit bonne et tout ca risque d'être galère...

Bon je ne suis qu'étudiant pour le moment, donc je te déblatère ce que j'ai vu en cours. J'ai un peu bossé sur le nématode en stage mais j'ai pas purifié de proteine.

Je pense que d'autre pourront t'aider aussi.

[A voir en vidéo sur Futura]