RFLP: génie génétique et diagnostiques

[invite86fe4f5c]

salut à tous j'ai un petit pepin,sur l'une ou l'autre chose concernant une methode de diagnostic de la drepanocytose(genie genetique).

Voilà,j'ai cru comprendre qu'en fesant une RFLP(comparaison de fragments d'adn normal avec celui d'un malade,ex;drepanocytaire),on pouvait detecter une substitution de nucleotides,jusque là ça va,puis,que grâce à cette methode on pouvait differencier un heterozygote d'un homozygote(recessif ou dominant),et c'est là que ça coince.

1)comment est ce possible?J'ai cru comprendre que l'heterozygote a 3 fragments;les deux fragments(correspondant aux personnes saines) et un autre plus longs(site de restriction modifie,celui du muté).

2°ce qui m'a emmené à vous poser une question du genre;Peut-on differencier un homozygote d'un heterozygote rien qu'en analysant son adn?Ca me parrait fou,ou bien cela n'est possible que pour des maladies connues(mode de fonction/sequence touchee)?

Bref si vous pouviez eclaircir le point 1(déjà),ça me serait d'une grande utilite.Merci.
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[invite43dd87ea]

Sur le point un je pense que ta réflexion est bonne, la RFLP se base sur des profils de restriction, hors si tu est hétérozygote il se peut que le second allele ne possède pas les les même sites de restrictions au sein de sa séquences, d'ou un profils de digestion différents.

[invite86fe4f5c]

oui,merci patfol,mais en fait je ne comprends pas,comment on peut reconnaitre un heterozygote d'un homozygote(bon je sais qu'ils ont deux alleles differents,quand même).En,fait je me demandais comment l'adn se desorganisait ,de chromosome en chromatine(à mon avis il y a un truc que je n'ai pas saisiz)?C'est lors de la replication de l'adn,qu'elle se condense(mitose),et devient chromosomes.

Bref je ne comprend pas comment en analysant l'adn,on peut dire qu'un individus est heterozygotes et comment il a de l'adn plus long(3 segment)[il n'y a quand même pas un fragment en plus chez l'adn des heterozygotes?]

Merci de me repondre,essayez au moins,je suis sûr que pleins de gens ont la reponse...sinon,je ne lacherai pas l'affaire.

[invite43dd87ea]

C'est pas un fragment d'adn en plus c'est qu'entre 2 allèle la séquence n'est pas la meme donc les enzymes de restriction ne les digère pas de la meme maniere....

Voila un lien peut etre que tu va comprendre c'est un dessin simple :http://www.ncbi.nlm.nih.gov/projects...genotyping.gif

Je ne comprends pas par contre tes questions sur la chromatine et tout ca, dans une RFLP l'adn est clivé, rien de plus.

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite86fe4f5c]

oui,je suis d'accord j'ai bien compris comment fonctionnent les endonucleases de restrictions,mais,ça cloche quand même,si par exemple la partie de sequence qu'on etudie fait par exemple;130 kbp,et qu'elle est digeree en 110 et en 20(si l'individu est sain homozygote) mais reste indissocie(130) pour les homozygotes recessifs. c'est qu'il y a bien presence d'un site de restriction,tout à fait d'accord.
Mais le hic...(pardon),viens des heterozygotes,si la sequence est de même longueur,elle ne peut donc pas se dissocier en 130+110+20=260,egal le double.
Ce qui confirme effectivement qu'il y a une lacune de comprehension de ma part(ou bien,un de truc dans le genre),et je me suis dit que ça devait être au niveau de la reorganisation des chromosomes en chromatine(,et de la bonne interpretation d'homozygotie/heterozygotie en fonction d'un bout d'adn[desole j'avais mal formulé tout ça,une sorte de soupe,SORRY]



*Quand je parle de chromatine,adn,chromosome ça n'a rien avoir avec RFLP,juste une question qui m'est venu de la tête parceque je ne connais pas le mecanisme.

[invite43dd87ea]

Je vois ce qui ne va pas mais je ne saurais te l'expliquer.
J'ai compris ce que tu veux dire par ton explication, pour moi quand je parle hétérozygotie je résonne en chromosome, donc une copie différente sur chaque chromatide d'où le profil de restriction avec une bande a 130 et une a 110+20 si tu veux, mais la ca me fais poser me poser une question que tu te pose aussi, comment l'hétérozygotie est présente dans la cellule

Voila comment je vois les choses, si tu es hétérozygote, tu possèdes une copie de chaque allele sur chacune des chromatides de tes chromosomes, donc lors de la division cellulaire une chromatide va dans une cellule et l'autre dans une autre donc au final, tu aura une cellule avec un allele et une cellule avec un autre, donc je vois l'heterozygotie comme quelque chose que l'on obtiens lors de la fecondation mais au final un être est une "chimere" avec une population de cellule qui ont un allele et une autre population de cellule qui ont l'autre allèle.

Comme lors d'une rflp tu bosses sur des cellules et non une cellule, tu aura forcement des cellules de chacune des populations, te permetant d'avoir l'allele 1 et 2

Donc voila ce que j'en pense, a mon avis je dois me planter sur pas mal de chose et la notion d'hétérozygotie me parrait flou a moi aussi désormais

Est ce que quelqu'un pourrait corriger mes dires ??

[invite43dd87ea]

Personne pour confirmer ou infirmer mes dires?

[invite86fe4f5c]

Moi peut-être. je ne suis pas specialement avancé en genetique mais ça m'etonne que les autres nous aient laissés nous planter,sur une question aussi evidente(ils savent surement nous repondre) ,en fait je crois que j'ai compris(et si c'est vraiment ça je m'enveus mechament).

Bon,sur une RFLP,on ne travaille pas sur differentes cellules,enfin si ils ne le specifient pas c'est qu'ils ne le font pas.Mais par contre la seule reponse serait qu'ils travaillent sur LES 2 PAIRES DE CHROMOSOMES HOMOLOGUES,et puis jusqu'à preuve du contraire je ne crois pas qu'on soit fait d'une population de cellules differentes(comme chez les chats à pelage mozaïques,et là encore ce n'est que certain types de cellules).

J'avais ommis une chose extremement importante(parceque je n'avais pas bien fais le lien...oh,je m'enveus vraiment) en genetique,LA DIPLOIDIE,eh oui,maintenant il est tout à fait logique,qu'ils aient(les heterozygotes) 110+130+20=260,c'est parcequ'on a fait une rflp sur les 2 CHROMOSOMES,et ça repond à mes questions du coup,on peut detecter un homozygote ou heterozygote,mais en ayant donc pas UN chromosome mais 2 chromosome,LOGIQUE,puisque un parents transmet un allèle à un chromosome et l'autre parent à l'autre....

Donc dans mon cours on aurait du écrire(pour qu'il n'y ait pas confusion):

heterozygote:110 +130+20=(et là c'est bien egal à 260,ouuuuuf)

et homozygote(recessif): 130+130=la même chose(heuresement)

et homozygote(sauvage):110+20+110 +20=260 ok

cordialement

[invite43dd87ea]

Je viens de me relire mais qu'est ce que j'ai honte !!!! J'ai raisonné n'importe comment et je me suis embrouillé tout seul lol !! Enfin voila tu as compris et j'ai compris mon erreur donc c'est cool au final...

Mais la honte quand meme sur moi...