Bonsoir a tous,
Bon voila je suis confronté a des problemes avec le sequençage d'un plasmide.
Sur chacune des mes sequences, la réaction s'arrete de facon brutale (quelquesoit le brin que je séquence).
Je pense que c'est du a la présence d'une structure secondaire (un pseudonoeud) que j'ai mis dans mon insert, et qui bloque la polymerase durant le séquençage.
Ca m'ennuye car j'ai vraiment besoin de savoir si la séquence est bonne, et du coup il me manque toute la région du milieu!
J'aurai aimé savoir si certains ont été confronté a ce probleme et comment ils l'ont résolus?
d'un point de vue technique je séquence mon plasmide avec le kit 'bigDye" de chez applied biosystem sur un sequenceur ABI310.
J'avais pensé rajouter du DMSO, mais je sais pas si c'est utile et surtout si le kit va encore marcher... any idea?
Merci par avance
YOyo
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