Bonjour,
Cela fait 6 mois que je me prend la tête avec un clonage et la je bloque!!
Pour le clonage 1 :
D'un coté, mon insert, récupéré par PCR (2100pb) a été digéré par 2 enzymes XhoI/HindIII. Le fragment est a la bonne taille.
De l'autre, mon vecteur (3550pb), digéré par les même enzymes, à la taille attendue (et les enzymes coupent, je les ai vérifié séparément).
Je fais ma ligation, 1h à température ambiante avec le tampon 2X de promega.
Je vérifie par PCR la ligation et la rien, idem après transfo.
Pour le clonage 2 :
D'un coté, mon insert, récupéré par PCR (200pb) a été digéré par XbaI/SmaI. Sur gel tout est ok.
De l'autre, mon vecteur(7100pb), digéré par les même enzymes. Sur gel tout est ok.
Après ligation, et PCR sur ligation, je vois que les extrémités XbaI sont liguées mais pas avec SmaI.
Pourquoi je comprend pas.
Voilà, si quelqu'un peu m'aider je suis preneuse.
Merci d'avance. Charlotte
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