Bonjour,
Depuis peu j'ai des contaminations sur mes boites de gélose lors de mes transformations...
J'ai fais une transformation en bactéries Top10F' pour effectuer une recombinaison homologue entre un plasmide conférant une résistance ampicilline et un ADNg. A l'issu de la transformation de petites colonies sont apparues sur la gélose après 24h d'incubation...jusque là tout est normal.
Plusieurs problèmes se pose lors des miniprep:
- tout d'abord certaines colonies prennent une coloration vert-bleue lors de la mise en culture liquide....
- Lorsque je centrifuge les bactéries, le culot n'a pas un aspect normal et "blanc" comme il doit l'être habituellement avec des E.Coli.
- ensuite, lorsque je fais les miniprep, je ne récupère aucun ADN...quantification très faible et dépot sur gel négatif...
Il ne s'agit donc ni de mon plasmide recircularisé, ni de mon plasmide recombinant, ni d'un ADN plasmidique quelconque...
Est-ce que j'ai une contamination une bactérie quelconque résistante ampicilinne ? Comment ai-je pu contaminer...sachant que je travail sous une hotte, avec des gants et bien proprement ???? Apparement il ne s'agit ni des boites, ni du milieu de culture, ni du SOC....je ne comprend pas !!!!
Merci d'avance pour votre aide !!!
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