Comment couper "proprement" un peptide

[invite31f74f0e]

Bonjour a tous,

Je suis actuellement en thèse de chimie et je travaille sur des glycoprotéines (GP).

Je cherche à effectuer une analyse des constituants de mes GP en sucres et acides aminés.

Pour libérer les sucres, je pense faire une méthanolyse acide (NeOH, HCl) et ensuite, je dérivatise mes sucres par triméthylsililation pour une analyse GC

Mais pour le peptide, je bloque, car je ne sais pas comment les isolés et surtout comment les fragmenter "proprement". J'ai lu que l'on peut hydrolyser les peptides avec du HCL 6M à 110°C, mais entre autre, cela dégrade la trp et la cys.

connaissez vous un moyen d'isoler mes peptides? Existe t-il une enzyme capable de couper la liaison peptidique, quelque soit l'acide amminé?

je vous remercie d'avance pour votre réponse

Logan
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[invitea0443c8c]

Bonjour!
La plupart du temps, lorsque l'on veut couper une protéines en petits peptides par exemple pour faire de la spectro de masse, on utilise la trypsine et/ou chymotrypsine (qui coupent après les lysines et arginines) ou d'autres protéases.

V.

[invite31f74f0e]

y a aps une enzyme spé de la liqiason peptidique qui couperais entre tout les acide aminé. parce que les petits peptides a id en Gc, je suis pas sur de pouvoiir le faire

[invite3f756d03]

bonjour
outre lesprotease un traitement au bromide cyanogen (CNBr) te permet de couper au niveau c term des methionine.

[A voir en vidéo sur Futura]

[inviteb6144ea4]

Bonjour,

je dis peut être une betise mais il y a toujours la possibilité de faire une dégradation d'edman (si le peptide n'est pas trop grand, sinon ça peut être long). Cette dégradation coupe acides aminés apres acides aminés à partir de l'extrémité N-terminale.

Par contre, je ne sais pas ce que tu veux faire avec les acides aminés isolés car, attention, la réaction d'edman ne libère pas un acide aminé "natif" mais un complexe acide aminé-PTH

A+