Fournisseur plasmide d'expression (avec ORF spécifique)

[Vinc]

Bonjour à tous!

Je recherche une boite qui pourrait me fournir (rapidement) un plasmide d'expression avec l'ORF de mon choix (de la même manière que l'on choisi des siRNA dans une banque).

J'ai un plasmide gateway (sans promoteur) de chez Invitrogen et je suis déjà en train de faire sortir la séquence pour la mettre dans un pDEST, mais nous avons quelques problèmes.
La question que l'on pose à l'aide de ce plasmide est urgente donc j'aimerai trouver le plus vite possible un plasmide d'expression AVEC PROMOTEUR et l'ORF d'intérêt. J'ai regardé chez Dharmacon, Invitrogen, Qiagen, Eurogentec et je n'ai rien trouvé!

Quelqu'un a t-il une idée?

Merci d'avance


V.
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[piwi]

Il doit bien y avoir des boites style start-up qui font des clonages à demande. Je peux essayer de me renseigner mais je ne pense pas qu'ils soient rapides.
Il est si difficile que ça à faire ce clonage? C'est quoi le souci? Faire entrer le promoteur j'imagine vu que tu as déjà ton insert en gateway.

[Vinc]

Non ce n'est pas dificille en effet mais la technicienne qui fait les clonages n'a plus de bactos ccdB compétentes donc il faut en refaire, puis refaire du vecteur hôte, ajouté à cela d'autres problèmes, etc... Enfin bref c'est une accumulation de petits problèmes qui au final nous font perdre du temps et on ne peut plus trop se permettre d'attendre car le résultat de la manipe peut remettre le sujet en cause (d'où notre empressement). Eurogentec fait des clonage à la demande mais ça prend 15 jours ouvrables donc....


Merci quand même!


V.

[piwi]

Je ne pense pas que tu puisses descendre en dessous de 15j ouvrables quelque soit la boite (et ça ne doit pas compter les délais d'envois)
Refaire des bactéries compétentes ne prend pas tant de temps que cela (bon le rendement n'est pas toujours génial quand on a pas l'habitude). Vous avez meilleur temps de faire tout ça vous même... Sinon les bactéries compétentes peuvent s'acheter toutes faites si c'est ça qui est limitant (je ne sais pas si il y a spécifiquement celles que vous voulez en revanche).

[A voir en vidéo sur Futura]