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Problème Western Blot



  1. #1
    fallbalah

    Problème Western Blot


    ------

    Bonjour à tous!
    voilà j'ai un souci depuis quelques temps avec mes gels de Western Blot!!
    je n'ai pourtant rien changé dans ma préparation....
    je fais des gels 10%
    avec eau, acrylamide, tris, APS et Temed
    gel de séparation puis gel de concentration
    tout polymérise bien
    le problème c'est quand j'enlève le peigne, les puits ont l'air bien....au moment de chargé dans les puits, il y a comme de l'acrylamide qui bouche les puits???
    c'est très bizarre....du coup c'est la galère pour chargé voir impossible!!!
    je désespère
    à quoi cela peut il etre du?
    merci d'avance!

    -----

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  3. #2
    piwi

    Re : problème Western Blot

    Je commencerais par refaire les solutions d'acrylamide (sous réserve que vous refassiez votre APS à chaque fois. Si ça n'est pas le cas, commencez par cela). Ca ne vieillit pas forcément bien et ça n'aime pas la chaleur. Il suffit de les avoir gardé un peu trop longtemps en bord de paillasse pour que ça donne des choses pas géniales.

    Cordialement,
    piwi
    Je sers la science et c'est ma joie.... Il parait.

  4. #3
    IngDr

    Re : problème Western Blot

    Je confirme Piwi, l'APS, se conserve 1 mois au frigo, après il y a une baisse d'activité. C'est peut etre pas perceptible, mais les gels sont ensuite moins "fermes". Idem pour la solution d'acry qui aurait passé quelques nuits sur un bord de paillasse...

    Je fais systématiquement un nettoyage des puits avec dépot, soit avec un pissette d'eau ou une P1000, je trice fortement (pas trop fort non plus) de l'eau dans les puits pour faire partir l'acry non polymérise

  5. #4
    Yoyo

    Re : problème Western Blot

    Salut

    J'avais eut ce genre de probleme, l'epaisseur de mon peigne etait inferieur a celui des spaceurs! du coup il y a de l'acry qui se glissait entre le peigne et la plaque en verre!

    YOyo

  6. A voir en vidéo sur Futura

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