Rendement maximun d'une maxiprep Qiagen ?
Hello tous,
Mon chef me certifie qu'il a obtenu un jour 2mg d'ADN plasmidique avec un kit Qiagen maxiprep. Perso, mon rendement max fut un peu plus de 1mg avec 1litre de culture.
Qu'en dites vous ? Si vous avez déjà utilisé une maxiprep Qiagen (pas une giga hein !), quelle est votre record?
Pour l'aspect technique, c'est sans doute la colonne qui est le facteur limitant, mais quelle quantité maximum de DNA peut elle fixer ?
Salut,
Il me semble que la quantitee max pouvant etre fixee sur la colonne est ecrite sur le protocole non?
A+
J'ai jamais utilisé Qiagen, mais d'après les données qiagen, un kit maxi donne au max 750 µg !
Pour les 2 mg, quelle était la pureté (rapport 260/280) ? Cela a-t-il été vérifiée sur gel ? 1L de culture me parait enorme pour une colonne maxi sachant que le volume recommandé est entre 100 et 250ml ! A utiliser un volume trop important il y a un risque de boucher la colonne, ou d'avoir une plasmide mal purifié, voire de perdre du plasmide. (vu que ceci est valable pour la concurrence, je pense que ca doit aussi l'etre pour qiagen).
Pour le volume il me semble que la confusion vient de l'utilisation imparfaite des termes dans certains labos.
250ml correspond dans les protocoles à une midiprep. La maxiprep c'est encore plus et la limite haute pourrait être un litre (j'ai pas vérifié). Après derrière il y a la gigaprep.
Je crois que pour simplifier la plupart des gens parlent de miniprep pour la prep de que 3-5 ml et de maxiprep pour les plus gros volumes.
Cordialement,
piwi
Je sers la science et c'est ma joie.... Il parait.
En fait je me suis basé sur les données montrées ici :
http://www1.qiagen.com/Products/Prod...t.aspx?AID=466
La confusion peut venir d'une différence de dénomination entre fabricants.
Cordialement,
Salut,
Chez Promega, c'est 5-10 mL pour la miniprep et 100 mL la midiprep. Pour la maxi je sais pas j'ai jamais fait.
Avec la mini ou maxi je suis arrivé au mieux à 400 ng/µL avec un rapport A260/A280 de 1,8. Je récupère 300 µL pour une midiprep soit au final 120 µg d'ADN. Si on considère une maxiprep faite à partir de 1 L de culture, soit dix fois plus on peut obtenir 1,2 mg. Donc j'ai à peu près la même chose que toi remorhaz ^^.
Après ça peut aussi dépendre du temps de culture des bactéries ...
ca dépend aussi du type de vecteur. Et pas que low copy et high copy. En fonction de l'insert, certains vecteurs s'expriment moins bien que d'autres.
