Pureté de L'ADN

[invite79a40218]

Bonjour !

J'aurais une question à propos de la PCR.
Je voudrais savoir que faire lorsqu'une mauvaise pureté de notre ADN inhibe la qualité de notre PCR ?

merci d'avance
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[invite4ff72fd5]

Quelques idées me viennent :

- Améliorer la pureté

- Changer les amorces pour qu'elles soient plus spécifiques.

- Sinon faire une PCR nichée .

[invite8c0cc995]

reduire la concentration des contaminants en diminuant le volume de matrice ou en augmentant le volume réactionnel.
Le plus simple est de repurifier si possible (sur mini colonne c'est rapide, mais tout depend du type d'ADN (geno, plasmide, etc...)).

[inviteeab8e911]

bein le plus simple est de le reprécipiter (Phenol/Chlo) et de ne pas se louper sur les lavages.

Sinon, si tu es une grosse brute, prépare ton ADN au Chlorure de Césium, la pour le coup il sera propre ton ADN (mais faut etre motivé :P )

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite98839ab8]

Salut,
tu peux essayer de rajouter du T4gp32 dans ton mix de PCR.
nous on s'en sers quand on fait des pcr avec des adn extrait de milieu complexe.
Si tu as besoin de détail hésite pas

[invite79a40218]

Ok, merci pour vos réponses.
Je crois que je vais essayer de repurifier mon ADN.