bonsoir quelqu'un peut m'aider a comprendre une technique de purification d'une proteine acide intracellulaire . Le protocol de purification est le suivant :
1- homogéneisation en presence d'une détergent(Triton X100 : détergent non ionique ).
2- Centrifugation et récuperation du surnageant.
3- Chromatographie sur diéthylaminoéthyle (DEAE)-Séphadex à pH 5
(tampon citrate de sodium 0,01 M), élution par un gradient de force ionique .
4- Précipitation en milieu acide par dialyse contre un tampon citrate de sodium 0,02 M pH3.
5- Centrifugation, puis dialyse du surageant contre un tampon phosphat 0,01M pH 6,8.
6- Chromatographie d'absorption sur hydroxylapatite, élution par un gradient de force ionique.
7- Dialyse contre un tampon phosphate 0,01M pH6,8.
8- Chromatographie sur carboxyméthyl (CM)-Séphadex (même tampon).
9- Récuperation des fraction actives non retenues, et dialyse contre un tampon citrate de sodium 0,01M pH5.
10-Chromatographie sur Séphadex G-100 (même tampon).
La question c'etait de preciser brievement chaque etape mais la prof de td est passe tres vite sur cette question et je pas bien note.Pouvez vous m'expliquer a partir de l'etape 4 svp?merci d'avance
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