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Purification d'une proteine acide



  1. #1
    glaukia

    Purification d'une proteine acide


    ------

    bonsoir quelqu'un peut m'aider a comprendre une technique de purification d'une proteine acide intracellulaire . Le protocol de purification est le suivant :
    1- homogéneisation en presence d'une détergent(Triton X100 : détergent non ionique ).
    2- Centrifugation et récuperation du surnageant.
    3- Chromatographie sur diéthylaminoéthyle (DEAE)-Séphadex à pH 5
    (tampon citrate de sodium 0,01 M), élution par un gradient de force ionique .
    4- Précipitation en milieu acide par dialyse contre un tampon citrate de sodium 0,02 M pH3.
    5- Centrifugation, puis dialyse du surageant contre un tampon phosphat 0,01M pH 6,8.
    6- Chromatographie d'absorption sur hydroxylapatite, élution par un gradient de force ionique.
    7- Dialyse contre un tampon phosphate 0,01M pH6,8.
    8- Chromatographie sur carboxyméthyl (CM)-Séphadex (même tampon).
    9- Récuperation des fraction actives non retenues, et dialyse contre un tampon citrate de sodium 0,01M pH5.
    10-Chromatographie sur Séphadex G-100 (même tampon).
    La question c'etait de preciser brievement chaque etape mais la prof de td est passe tres vite sur cette question et je pas bien note.Pouvez vous m'expliquer a partir de l'etape 4 svp?merci d'avance

    -----

  2. #2
    t0yt0y

    Re : Purification d'une proteine acide

    Bonjour,

    J'espère que ce n'est pas trop tard, surtout que je n'apporte pas vraiment de réponse, juste une partie d'un cours sur la dialyse qui pourra peut etre s'integrer dans ton processus de purif

    Cela concerne la renaturation des protéines. Par dialyse ou dilution, on peut éliminer progressivement le dénaturant, en exposant la protéine a des concentrations intermédiaires de denaturant. Et au final, a des concentrations intermédiaires, les intermédiaires de repliement sont susceptible de précipiter ...
    Allo, Stérique ?! Oui ... Ici Nétique !!!!

  3. #3
    gorben

    Re : Purification d'une proteine acide

    Salut,

    Je suis sur que si tu cherches a quoi servent toutes tes chromato, tu vas comprendre pourquoi est ce que tu fais une dialyse entre chaque...

    A+

  4. #4
    glaukia

    Re : Purification d'une proteine acide

    Merci à t0yt0y et à gorben.
    Si quelqu'un connait un site web ou sont precisé tout les methodes merci de me passer l'adresse ! A+

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