Dot Blot et Northern Blot

[Sonia75]

Bonjour, j'aimerai savoir la différence entre le dot blot et le northern blot.
Merci d'avance pour votre aide!
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[Sonia75]

Je rajoute une petite question, peut-on m'expliquer le principe de la technique du run on ?

Merci beaucoup, je m'y perd carrément avec toutes ces techniqueS ...

[piwi]

Le dot blot c'est un peu l'ancêtre du western blot. On dépose les protéines sur une membrane, ça fait une tache (le dot) et on révèle grâce à des anticorps.
Le nothern blot, on fait migrer des ARN dans un gel afin de les séparer. On les transfère sur une membrane et on révèle la ou les bandes qui nous intéressent grâce à l'hybridation de sonde ribonucléiques marquées.

A part la membrane, il n'y a finalement aucune similitude. La question que je ne m'étais jamais posé c'est est ce que l'on a fait des dot blot avec autre chose que des protéines? (Je n'ai jamais pratiqué ou vu que cette application)

[wishangel]

Hello,

perso j'ai déjà fait un dot-blot avec de l'ADN et je pense que ça doit être possible avec les ARN.

[piwi]

Si je peux me permettre d'être curieux, quel est l'intérêt d'un dot blot avec des acides nucléiques et plus particulièrement avec de l'ADN?

Cordialement,
piwi

[A voir en vidéo sur Futura]

[Sonia75]

Oui c'est possible aussi avec l'ARN

Personne ne sait ce qu'est la technique du "run on "??

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[wishangel]

J'ai utilisé le dot blot sur l'ADN génomique bactérien lorsque je cherchais la présence d'un gène dans un grand nombre de souche. Ca m'a permis de faire un premier screening rapide avant de continuer le reste des tests.

[piwi]

Mais c'était un dot blot ou un colony lift? Moi quand j'ai eu à screener la présence d'un gène comme tu l'as fais j'ai préféré le colony lift (réplique des colonies sur une membrane nitrocellulose puis en gros l'équivalent d'un southern blot). En revanche je n'ai pas déposé directement l'ADN extrait de chacune des colonies gouttes à gouttes sur la membrane.

[gorben]

Salut,

Le dot blot sur les acides nucleiques ca sert pour l'ARN : quantification de l'expression (quantifier sur des dot est beaucoup plus simple et juste que sur une bande d'electrophorese).
Pour l'ADN ca peut etre utiliser pour mettre en evidence une insertion, ou pour "quantifier" le nombre de copie d'un gene par genome, voire par cellule (pour les bacteries eb tout cas dans la mesure ou en pleine division il peut y avoir jusqu'a 16 origines de replications).

A+