Interêt d'une réduction et d'une alkylation pour un gel bidimensionnel

[inviteb6144ea4]

Bonjour à tous,

je débute cette semaine un stage où je dois réaliser des gels d'électrophorèse bidimensionnel couplé au western blot.
Dans le protocole du gel 2D, juste avant de lancer la migration de la deuxième dimension (séparation en fonction du poids moléculaire) deux étapes de réduction et d'alkylation sont necessaires.

Ma question est simple: quel est l'intêret de ces opérations? Est-ce pour rendre les protéines le plus neutre possible et les faire ainsi migrer seulement en fonction de leur poids?

Merci par avance pour toute vos réponses
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[invitea0443c8c]

Bonjour!
La réduction (via un thiol comme le beta mercapto éthanol) permet de réduire (i.e éliminer) les ponts dissulfures. Les agents alkylants se fixent sur les résidus souffrés et permettent d'empêcher toute reformation de ces ponts dissulfures. La plupart du temps on utilise simplement une réduction (je n'utilise jamais l'alkylation).

V.

[inviteb6144ea4]

Ah! Ok! C'est bête comme chou!

Comme nous n'utilisons pas de mercapto mais du DTT, je n'y avais pas pensé. Je ne pensais pas que le DTT pouvait réduire les ponts disulfures.

Merci beaucoup

[invitea0443c8c]

Ah! Ok! C'est bête comme chou!

Comme nous n'utilisons pas de mercapto mais du DTT, je n'y avais pas pensé. Je ne pensais pas que le DTT pouvait réduire les ponts disulfures.

Merci beaucoup

Le DTT a la même action que le beta mercapto (d'ailleurs je l'utilise préférentiellement au beta mercapto).

V.

[A voir en vidéo sur Futura]

[inviteb6144ea4]

Merci pour toutes ces explications!