Clonage moléculaire

[inviteec077029]

Bonjour,
La distance entre le promoteur et le ATG ne doit pas dépasser un certains nombres de paire de base.
Connaissez vous une certaine limite? J'ai fais un clonage avec un ATG à environ 200pb de son promoteur est-ce raisonnable?
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[invitec9f0f895]

salut

chez quel organisme?

YOyo

[inviteec077029]

Je compte transfecter ce vecteur contenant un gène de souris produit chez E.Coli dans des fibroblastes de souris.

[invitec9f0f895]

Salut

attention ta phrase est particulierement mal tournée. On croirait que c'est le gene de souris qui est produit chez coli, alors que j'imagine que tu parlais du plasmide.
Si ton ATG est dans un bon contexte d'initiation et qu'il n'y a pas d'autres ATG dans les 200pb avant, je pense qu'il n'y aura pas de soucis.

YOyo

[A voir en vidéo sur Futura]

[inviteec077029]

Oui pardon c'est bien du plasmide que je parlais.
Ok je vais essayer comme sa ma transfection, autrement par précaution je reverrais la construction

[invitee863e61a]

Oui pardon c'est bien du plasmide que je parlais.
Ok je vais essayer comme sa ma transfection, autrement par précaution je reverrais la construction

Pour info, chez E.coli il y a des promoteurs situés aussi loin voir plus loin du codon START (ou même de la région d'initiation de traduction).