Bonjour,
Je fais des WB en ce moment et une personne du labo m'a mis des doutes car elle ne comprends pas que je normalise la quantité de protéines que je dépose sur mon gel.
Son raisonnement est le suivant:
Si on veut connaitre l'effet d'un produit sur l'expression d'une protéine A.
Soit une cellule 1 contenant, je dis n'importe quoi mais peu importe, 100 % de protéine A soit 1 ug de notre proteine A d'interêt.
Une autre cellule traitée avec notre produit contient 1ug de notre protéine A d'interêt mais aussi, 3 ug de protéines B car notre composé a boosté la synthèse d'une protéine B.
Quand je vais déposer mes protéines sur le gel pour le WB, si je dépose 1 ug de matériel de ma première cellule, je déposerai en fait 1 ug de ma protéine A d'interêt.
Si je dépose la même quantité de protéines issue de ma cellule 2, c'est à dire 1 ug, je dépose seulement 0,25 ug de protéine A.
Quand j'aurai le résulat de mon WB, je me dirais que mon composé testé à diminué la synthèse de ma protéine A d'interêt...alors qu'en fait ce n'est pas le cas, le composé a favorisé la synthèse d'une autre protéine.
J'espère que c'est clair...mais c'est compliqué à expliquer
J'attends votre aide, si vous avez compris la problématique...
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