Protocole de conditionnement en Histologie

[invitebaeeb312]

Bonjour, j'ai un soucis de leçon (je sais pas si je post dans la bonne section :s) :

en histologie on nous parle d'un "protocole type" pour permettre l'étude des tissus mais le problème c'est que la leçon n'est vraiment pas claire :/ ça parle d'inclusion, de fixation, de déshydratation, de conditionnement mais je ne comprends pas comment les étapes s'enchaînent et donc je ne comprends pas la leçon :/

Quelqu'un aurait il une idée de comment cela se passe, quelles sont les grandes étapes pour conditionnement d'un tissu en vue de son étude ?

D'avance Merci

Je suis en première année de médecine à bordeaux
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[invitebaeeb312]

Personne ne sait ?

[invite1f2fd87d]

slt
c'est pas dans le diapo de dubus?

[Flyingbike]

La fixation est la première étape : il s'agit de "fixer" le tissu en créant des laisons entre les constituants du tissu pour conserver sa structure et le conserver. Pour cela on peut le tremper dans diverses substances : le PFA, le formaldehyde, le formol, le TCA, etc.

En fait pour pouvoir étudier la structure d'un tissu il faut le couper en tranches. Pour cela on est obligé de l'inclure dans une substance qui permet de préserver l'organisation du tissu et d'obtenir des coupes suffisamment fines pour l'observation. Exemple : la paraffine. La paraffine n'est pas hydrosoluble, on va donc devoir deshydrater le tissu avant de l'inclure.
Pour cela on réalise des bains d'alcool:eau a contenu en alcool de plus en plus grand, par exemple 70% puis 90 puis 95 puis 100%. Le tissu est alors deshydraté.
Pour permettre à la paraffine de bien inclure le tissu, on va ensuite le tremper dans un solvant de la paraffine, ex : le toluène ou le xylène.
Le tissu est pret a etre inclus dans de la paraffine fondue.
Apres refroidissement et solidification de la paraffine, on peut réaliser des coupes, a l'aide d'un microtome par exemple et le déposer sur lames.
Pour l'observation microscopique, il va falloir etre capable de différencier les différents constituants du tissu. Pour cela il existe de nombreuses techniques de coloration générales: hémalun ou hématoxyline pour les noyaux, éosine pour les cytoplasmes, APS pour les polysaccharides, oil red-o pour les lipides neutres.... etc... ou spécifiques (immunomarquage, hybridation, ...)
La coloration la plupart du temps nécessite de déparaffiner le tissu (dans des bains de toluène/xylène) puis de le réhydrater (alcool puis alcool:eau a 90, 70, etc...). A ce moment la on peut réaliser les colorations.

Si on désire conserver les lames, il faudra les deshydrater (encore !) et les "monter" dans un milieu de montage adapté...

Je suis résté tres général exprès, si vous voulez des précisions n'hésitez pas.

[A voir en vidéo sur Futura]