Staurosporine et Protéine kinase C

[invitea0443c8c]

Salut à tous!
Je vais devoir, dans un avenir proche, essayer de mettre des cellules cancéreuses, du type MCF7 (tumeur mammaire), en apoptose, en utilisant la staurosporine!
Il semblerait d'après la biblio que la staurosporine inhibe l'action de la PKC et augmente la concentration cellulaire en calcium (ce qui me semble un peu contradictoire mais bon....)! D'après ce que j'ai lu, toujours dans la biblio, j'ai crû comprendre que l'action de la staurosporine était indirecte sur la PKC et agissait (peut-être) en amont de la voie des Gq! Tout cela reste assez flou donc si vous avez des infos sur l'action de cette staurosporine ou si vous avez bossé sur la mise en apoptose de cellules cancéreuses (même sur un autre type cellulaire!), n'hésitez pas, toutes les infos sont les bienvenues!
Merci à tous!!!
A+
Vinc
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[inviteb73ce398]

Si je me rappelle bien, la staurosporine a une structure similaire a l'ATP. Ce compose prend donc la place de l'ATP dans le site catalytique des kinases et empeche ainsi la reaction de phosphorylation. L'affinite de la staurosporine est plus ou moins forte pour certaines kinases (ex: PKC) ce qui pourrait le rendre plus ou moins specifique. Dans le cas precis d'inducteur de l'apoptose, j'avais dans l'idee que les doses utilisees etaient importantes, excluant toute possibilite d'interpretation quand a quel mecanisme etait mis en place. La seule certitude, c'est que ca induit de l'apoptose...

[invitea0443c8c]

Ok! Merci pour ta réponse!
En ce qui concerne les doses utilisées, dans les publies ça va de 1µM à 100nM! Mais nous on aurait plutôt voulu essayer une dose à 10 nM sachant que la staurosporine coûte horriblement cher (118€ pour 100µg)! Sinon, je suis daccord pour la structure mais il semblerait comme je l'avais dit dans mon premier post que la stauro agisse en amont de la PKC et pas directement dessus!
En tout cas merci encore d'avoir répondu
A+
Vinc

[invitea0443c8c]

Salut!
Après une après midi de recherche sur le sujet, on vient de voir que seules des MCF7 transféctés pour la caspase 3 (et oui car elles ne possèdent pas la fameuse caspase) passent efficacement en apoptose suite à une exposition à la staurosporine donc on va essayer autre chose (que j'ai commandé aujourd'hui d'ailleurs, mais je vous dis pas quoi..... )
A+ et n'hésitez pas si vous avez des infos sur la mise en apoptose de cellules tumorales!
Vinc

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite9e6bc039]

Et si tu nous disais exactement ce que tu veux faire, et pourquoi ?

Parce que si tu veux juste les faire entrer en apoptose, y'a pas mal de solutions

[invitea0443c8c]

Ok!
En fait on étudie la résistance à la chimiothérapie dans des cellules de cancers du sein de la lignée MCF7! On étudie en fait la régulation de l'activité d'une pompe, du phénotype MDR (multi drugs resistant), couplée à l'activité de canaux chlorures! On utilise donc la technique du patch-clamp ainsi que des tests en plaque!

A+
Vinc

[invite9e6bc039]

Cool


C'est quoi le genotype de cette lignee ? BRCA-1 ?

[piwi]

je crois si ma mémoire est bonne que la lignée MCF7 n'est pas faite de cellules cancereuse mais erait plutot un hybridome entre des cellules cancereuses et des lymphocytes.
Je me trompe?

[invite9e6bc039]

J'ai trouve ca, apparamment t'es pas oblige de transfecter caspase-3 :

Liang et al. (44) showed that MCF-7 cells can undergo apoptosis by the sequential activation of caspases-9, -7, and -6. Although caspase-3 is not required for TNF-induced apoptosis, it is required for some of the typical morphological changes of apoptotic cells, such as DNA fragmentation, and DNA fragmentation is not always observed in TNF-induced apoptosis in MCF-7 cells (45, 46). The presence of caspase-3 can increase a cell’s sensitivity to apoptosis-inducing agents. MCF-7 cells, which are relatively insensitive to many chemotherapeutic agents, acquire greater sensitivity to doxorubicin- and etoposide-induced apoptosis when caspase-3 is reconstituted (47). Future research may show whether maximizing cross-talk between the intrinsic and extrinsic pathways of apoptosis and upregulation of caspase-3 are potential targets for breast cancer therapy.

[invitea0443c8c]

Ta publi m'interesse beaucoup! Est ce que tu peux me filler la réference s'il te plait??? Ou l'a tu trouvée?? Sur Science-direct?? Pubmed??? Et si c'est possible que tu me fille aussi toutes les ref biblio cité dans ce passage (si je ne trouve pas ton papier)!
Pour tout te dire, on va essayer les étoposides (VP16) qui sont cités dans la publi que tu viens de me montrer, et également l'acide rétinoïque qui semble être efficace sur cette lignée! On utilise évidemment la doxo pour induire une régulation de la pompe!
Pour en revenir aux MCF7, non ce ne sont pas des hybrides mais bien des cellules dérivées d'un cancer métastasique du sein, chez une patiente américaine je crois, pendant les années 70.
Je vais également tester ces produits et la staurosporine, sur une autre lignée (NG 108.15) qui sont des neuroblastomes....
Pour l'instant tout ça reste assez flou parce que l'on essaye de mettre au point des protocoles et des "plans de bataille" pour avancer un peu! Mais quoi de plus complexe que la signalisation cellulaire????
A+
Vinc

[piwi]

mouarf le RA...
Bon courage avec ce joyeux cauchemard (c'est ma thématique principale, est ce qu'il y a plus tordu comme voie de signalisation? )

[invite9e6bc039]

Voila le papier:

Exp Biol Med (Maywood). 2003 Oct;228(9):995-1003. Articles,

Apoptosis, chemoresistance, and breast cancer: insights from the MCF-7 cell model system.

Simstein R, Burow M, Parker A, Weldon C, Beckman B.

Department of Medicine, Tulane University Health Sciences Center, New Orleans, Louisiana 70112, USA.



Toutes les ref' citees seront dedans

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[invite9e6bc039]

mouarf le RA...
Bon courage avec ce joyeux cauchemard (c'est ma thématique principale, est ce qu'il y a plus tordu comme voie de signalisation? )

La Biologie du developpement, j'me souviens que c'etait pas triste non plus

Mais c'est vrai que apoptose/cycle cellulaire/ checkpoint c'est assez coton

[piwi]

l'acide retinoique joue un grand role dans la biologie du developpement et c'est effectivement la tres grande sous thématique de l'equipe.
Avec sa plétor de recepteur c'est pas coton du tout cette vacherie là.
M'enfin je suppose que c'est pas encore les considérations qui interesse notre ami.
Le but du jeu est de voir ce que donne un diet enrichie en RA j'imagine.

[invitea0443c8c]

Merci beaucoup à vous deux! Oui pour l'instant on va certainement leur balancer du RA en testant diffrérentes doses et on va voir à partir de quand elles commencent à ne pas apprécier!
Je crois effectivement qu'il y a arrachement de cheveux en perspective........ parce que observer quelque chose c'est bien mais ensuite faut faire de la mécanisitique pour comprendre, à mon sens, ce que l'on observe, et c'est le plus interessant!
Si vous ave d'autres élements, surtout n'hésitez pas! Merci!
A+
Vinc

[invitea0443c8c]

Ok alors honte à moi.................Je connaissais cette publie!!!!
C'est la première que j'ai récupéré..... mais merci quand même!
A+
Vinc