Recherche de modification de proteine par anticorps

[invite3442d0ea]

bonjour
je dois vérifier la présence de différente décoration (phosphorylation, glycosilation..) sur une proteine et je ne sais pas comment procéder.
j'ai commencé à comprendre que je devais d'abord immunoprécipiter ma proteine avec un Ac spécifique, mais après je n'arrive pas à voir comment révéler la présence de la modification... je peux faire réagir ma proteine avec un Ac spécifique de ma décoration et migrer ma proteine sur gel puis révéler la présence de mon Ac spécifique à ma décoration? ça pose pb qu'il y ai 2 Ac au final il ne peut pas y avoir de réactions croisées?
merci de votre aide
-----

[invitea0443c8c]

Bonjour!
Tout dépend de la modification que vous souhaitez observer:
- phosphorylation : il existe des anticorps reconnaissant spécifiquement votre protéine phosphorylée et il existe même parfois plusieurs anticorps différents si la protéine a possède plusieurs sites de phosphorylation. Si il n'existe pas d'anticorps vous pouvez faire une IP contre votre protéine et révéler avec un anti phospho tyrosine ou un anti phospho serine. Vous pouvez également travailler avec du P32 radioactif.
- ubiquitination, SUMOylation, neddylation etc : purification, IP avec anticorps anti-ubquitine par exemple
- glycosylation : leur étude se fait par purification, spectro de masse, etc
- palmitoylation/miristoylation/farnésylation/... : la plupart des modification lipidiques peuvent être prédites par analyse de la séquence de la protéine étudiée. Souvent ces modifications peuvent s'observer en western-blot (comme la plupart des modification post-traductionnelles et on utilise des acides gras radioactifs comme l'acide palmitique marqué au tritium

Chaque modification doit être démontrée par un ensemble d emanipe et non pas par une manipe unique.

V.