Techniques de séparation des protéines.

[yodelisse]

Bonjour,

J'ai besoin d'aide à propos d'un exercice de Biochimie que je ne comprends pas du tout. Il faut dire que le cours ne me semble pas bien complet à ce niveau et la recherche sur internet ne m'aide absolument pas, voire m'embrouille encore plus à propos des méthodes de séparation des aa et des protéines.
De toute façon je ne comprend même pas l'enoncé..

Alors, il donne d'abord la structure schématique d'une protéine oligométrique que je ne suis pas en mesure de vous montrer ici mais peu importe, l'essentiel du problème n'est pas là..!

Enoncé :

Imaginez le graphe Abs (280nm) = f(V élution) des différentes fractions éluées de la colonne lors des expériences suivantes :

1--> La protéine est déposée sur une colonne de sedaphex G200 (euhhh premier problème kézako? j'ai lu que c'était un gel .. mais cela reste flou pour moi )

2--> La protéine est traitée par le SDS (??) et l'urée 8M (??????????) puis déposée sur la même colonne.

3--> La protéine est traitée par le SDS, l'urée 8M et le B-mercaptoéthanol ( ça je sais que ça rompt les ponts disulfure mais bon..c'est tout ce que je sais), puis déposée sur la même colonne.

4--> La protéine est traitée uniquement par le B-mercaptoéthanol, puis déposée sur la mêrme colonne.


En gros, je suis censée faire quoi ? Aodpter qu'elle méthode pour résoudre l'exo ?

J'ai vraiment du mal avec les techniques de chromatographie et électrophorèse.. Helppppp.

D'autant plus que j'ai pleins d'autres exos incompris à ce sujet.. Donc quand il n'y en a plus, il y en a encore.. Mais chaque chose en son temps !

Merci à ceux qui pourront m'éclairer, et bonne fin de journée à tous
( C'est dingue, faire de la biochimie par un si beau temps.. )


Yodelisse.
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[invite17a570c1]

Salut et bienvenue,

1--> La protéine est déposée sur une colonne de sedaphex G200 (euhhh premier problème kézako? j'ai lu que c'était un gel .. mais cela reste flou pour moi )

Déjà, c'est Sephadex
Il s'agit d'une colonne de gel dont les particules ont des tailles différentes. Ca laissera ou pas passer les prots selon leurs tailles.

2--> La protéine est traitée par le SDS (??) et l'urée 8M (??????????) puis déposée sur la même colonne.

Faut pas abuser Tu as Google pour ce genre de questions de base.

3--> La protéine est traitée par le SDS, l'urée 8M et le B-mercaptoéthanol ( ça je sais que ça rompt les ponts disulfure mais bon..c'est tout ce que je sais), puis déposée sur la même colonne.

Tu traites ta protéine avec plusieurs choses à chaque étape. Quand tu te seras renseignée sur ce que c'est que le SDS et l'urée, tu y verras plus clair.
Mais mémorise ces différentes conditions expérimentales, c'est important.

En gros, je suis censée faire quoi ? Aodpter qu'elle méthode pour résoudre l'exo ?

Beh je ne sais pas Ca paraît pourtant clair : j'ai une protéine dont la structure est censée être oligomérique (càd j'ai des liaisons entre des parties, toussa). Je traite la protéine avec des composés dénaturants différents et je regarde comment ça sort par la même colonne (donc, trous de taille constante, mais protéine en états différents).

D'autant plus que j'ai pleins d'autres exos incompris à ce sujet

Et tu n'as jamais pensé à essayer de les refaire avec le corrigé? C'est un bon moyen de comprendre

Je te laisse regarder sur Google ce que c'est que SDS et urée, tu réfléchis donc aux conséquences de chaque traitement et tu dis ce que tu en penses. On continuera après

[yodelisse]

Bonjour et merci pour la réponse.



Désolé pour mon manque de recherche googlienne:s

Mais je me suis rattrapée

Alors, après quelques recherches,

J'ai trouvé que en gros, SDS ca dénature les protéins en cassant les liaisons à faible énergie. L'urée 8M semble faire la même chose, elle dénature et déplie la protéine.
Le B mercaptoethanol comme je l'ai dit rompt les ponts disulfure.


Pour l'exo on a donc :

1 -> la protéine reste entière
2 -> dénaturation avec cassage des liaisons faibles. On obtient 3 "morceaux" de la protéine d'apres sa structure schématique dans mon énoncé.
3 -> dénature + rompt les ponts disulfure. J'obtient cette fois 4 "morceaux".
4 -> seulement cassage des ponts disulfures, j'obtient 2 morceaux.


Dans l'énonce j'ai les PM de chaque morceaux possible.

Bon donc je commence à y voir plus clair mais je ne sais tjs pas au niveau du graphique ce que je dois faire, et à quoi c'est censé ressembler ?

Abs(280nm) ???? en fonction de V élution ?
J'ai besoin d'aide la dessus.
:s

Merci


Bonne fin de journée.

[invite17a570c1]

Dans l'énonce j'ai les PM de chaque morceaux possible.

Bon donc je commence à y voir plus clair mais je ne sais tjs pas au niveau du graphique ce que je dois faire, et à quoi c'est censé ressembler ?

Abs(280nm) ???? en fonction de V élution ?
J'ai besoin d'aide la dessus.
:s

Merci


Bonne fin de journée.

Si tu donnes l'énoncé au compte-gouttes et sans les images, je crains qu'on ne puisse pas grand-chose pour toi...

[A voir en vidéo sur Futura]

[invitebd401ee3]

bonjour j'ai voulu juste ajouter une petite remarque
SDS offre des charges négatifes au proteines
bon tu disai que tu as bcp d'exos sur la chromato et éléctrophorése j'aimerai bien que tu me les envoie car j'ai un examain bientot sur sa
Cordialement

[yodelisse]

Tout mon énoncé est donné dans mon premier message, il manque simplement la structure schématique de la protéine.

La voilà :


PM : 1000 NH2----------------------COOH
.............................. ..|.............|
PM : 2000 NH2 ----------------------------------------------COOH
.............................. .......S...............S...... ..........S
.............................. .......S...............S...... ..........S
PM : 2000 NH2-----------------------------------------------COOH
.............................. ...|.............|
PM : 1000 NH2----------------------COOH


Les SS correspondent bien sûr aux ponts disulfure, et les barres verticales aux liaisons de faible énergie.
(ne pas faire attention aux petits point, c'était juste pour la mise en forme.)
Seulement voilà, l'enoncé ne me dit pas à quoi correspond le graphique : Abs(280nm)=f(Vélution)


(ninio 213, pour t'envoyer l'énoncé de mes exos, pas de soucis, mais je n'ai pas les corrigés. Enfin pas encore. )



Bonne nuit et Bonjour.

[invite17a570c1]

bonjour j'ai voulu juste ajouter une petite remarque
SDS offre des charges négatifes au proteines
bon tu disai que tu as bcp d'exos sur la chromato et éléctrophorése j'aimerai bien que tu me les envoie car j'ai un examain bientot sur sa
Cordialement

Pourquoi ne pas demander ce genre d'exos dans la rubrique qui y est dédiée? http://forums.futura-sciences.com/ex...es-voulez.html
Ca évite de polluer des discussions déjà en cours

Seulement voilà, l'enoncé ne me dit pas à quoi correspond le graphique : Abs(280nm)=f(Vélution)

L'absorbance à 280 nm est fonction du volume d'élution.
Tu pourras lire un peu plus ici, là et là.

[invitebd401ee3]

c'est pas grave yodelisse
commance par m'envoyer les exos pour que j'esseye de les resoudres tt seul et aprés on verra pour la solution
Cordialement

[JPL]

Ce n'est pas ainsi que marche un forum : d'une part il n'est pas question de faire les exercices des demandeurs mais de les guider et de les aider ; d'autre part cela doit être fait publiquement... mais dans le bon forum.