séparation des proteines

[inviteff019068]

bonjour,

solution de départ: serum albumine +bichromate de potassium
pour séparer ma proteine du bichromate je l'ai fait en utilisant un gel de filtration (sephalex). puis j'ai effectué la réaction de biuret avec le réactif de gornall
pour avoir le rendement de ma reaction, j'ai fait la somme des densités optiques des éluats obtenus après la separation de ma proteine, divisé par la D.O de ma solution initial(serum albumine +bichromate).
le problème c'est que j'obtiens un rendement de 113%

pourquoi? aurais je mal manipulé? est ce du à une espèce parasite?

merci d'avance
turquoise11
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[invite28f6e6c6]

Plusieurs solutions: tu as récupérer presque tout mais les impressisions de dosage fond que tu as + que 100%
Sinon, le bichromate peut interférer dans le dosage avant purif et diminuer la DO. Du coup, tu as + que 100%.
Un test, sur un peu de ta purif, rajoute du bichromate et verifie le dosage...

[invite1c25428c]

De la gel filtration pour ça? Le plus simple est de dialyser ta protéine, comme ça tu ne perdra rien du tout!

Pour faire ça achètes du boudin de dialyse, c'est assez long mais ça fonctionne bien. Sinon tu peux centrifuger sur tubes centricon.

Ensuite pour doser je te conseille de prendre ta DO à 280 nm dans avec ta protéine diluée au 1/10 dans de la guanidine 6M, ensuite avec le epsilon molaire de l'albumine et la loi de beer lamber tu retrouves ta concentration le plus simplement du monde.