Séparation des protéines: HPLC!!

[inviteaaf00eca]

bonjour a tout le monde j'ai un melange d'info j'espere que quelqu'un de vous pourait me rependre!!
HPLC=chromatographie en phase inverse:
phase stationnaire=apolaire
phase mobile=polaire
donc les molecules apolaires vont etre retenues or les polaires ,j'ai dans mon cours qu'elles vont rester dans la phase mobile ,1)pourquoi elles ne seront pas eluer
d'autre part si on a
phase stationnaire=polaire
phase mobile=apolaire
est ce que cette methode(X)garde le nom (HPLC)?
en fait j'ai dans mon cours qu'on peut pas separer les proteines par HPLC,ça est due a quoi puisque les proteines peuvent etre polaire comme elles peuvent etre apolaire?
une derniere chause c'est que dans un exercice on a separé les proteines en se basant sur la technique (X)alors en fait je crois qu'elle a le meme principe que HPLC?

merci d'avance a ceux qui j'espere me rependre et un gros salut au contact de ce forum
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[invitebc4d5f36]

à la question 1), rester dans la phase mobile = etre élué, ou plus exactement filtré dans la mesure où elles n'ont jamais été retenues.
à la question 2), non je ne pense pas que l'on parle de HPLC. la haute pression a été, il me semble , mise en oeuvre que sur de la chromoto en phase inverse.
à la question 3), je ne vois pas trop, j'ai une copine qui sépare fréquemment des protéines en HPLC...
question 4) entre l'HPLC et ta méthode X,le principe reste le meme, seulement, les phases polaires et apolaies sont inversées.
en espérant t'avoir aidé.

[inviteaaf00eca]

merci pour ta repense meme si je saisie pas bien encore les chause

[invite9b06c290]

HPLC = chromatographie en phase liquide à haute pression (ou performance).

Phase "normale" = silice (polaire)
Phase "inverse" = silice greffée (apolaire, C18 ou C8)

en phase inverse, les composés polaires sont élués en premier (pour des protéines, les plus petites sortent d'abord). Ensuite, avec l'augmentation de solvent polaire dans le phase mobile (methanol, acetonitrile) les molécules hydrophobes (ou les grosses protéines) seront éluées.

Est-ce clair ?

[A voir en vidéo sur Futura]

[invited57039d3]

Bonjour,
je ne comprends pas pourquoi ce sont les petits composés qui sortent en premier!
je pensais que c'était le contraire, les petits étant retenus plus longtemps à l'intérieur des billes de la colonne.
Où est mon erreur? merci de m'éclairer!

[invitead282ff2]

Je pense que tu confonds avec une gel filtration.

Morphine

[invite32ebe868]

Sur wikipédia, je trouve que c assez bien expliqué
http://fr.wikipedia.org/wiki/Chromat...te_performance

[invited57039d3]

Bonjour,
A quoi correspond le pic du solvant?
Merci.

[invite30157012]

Oui Anne tu confonds avec une chromato d'exclusion par la taille....!