éléctrophorèse bidimentionnelle et Phi
bonjour tous le monde
ma question concerne la 2-D éléctrophorèse; je sais que dans cette méthode permet les protéines sont séparées en premier lieu par leur point isoélectrique et dans un second temps par leur masse (SDS PAGE)
ce que ne comprend pas
c'est la composition du gel ; le premier doit avoir des pH différents; et le deuxième est un gel dénaturant !!!!SDS
et comment interpréter ce gel !!
aidez moi je vous pris ; je suis complétement perdu
La réponse est simple: en pratique ce sont deux gels différents, le SDS PAGE est fait ) partir d'une bande issue de la migration e fonction des pHi. Suis assez clair?
Le gel 1, séparation en fonction du point isoélectrique, comporte un gradient de pH fixé sur l'acrylamide du gel, par exemple pH 3-10. Le gel (4X d'acrylamide/bis acrylamide) ne permet pas la séparation des protéines en fonction de leur taille du fait de la faible concentration en acrylamide. Le detergent utilisé dans ce gel n'est pas du SDS (négativement chargé) mais du CHAPS non chargé.
Apres une étape de changement de détergent par trempage de la bandelette de 2D, on met du SDS sur les protéines.
Dans le 2e gel, les protéines seront séparées en fonction de leur taille dans un gel + concentré (8 à 12%). La bandelette est simplement déposé sur le gel de 2e dimension.
Ce schéma simple te permettra de bien comprendre les 2 étapes.
