séquences régulatrices
Comment peut-on arriver à isoler une séquence régulatrice d'un gène qui est exprimé spécifiquement dans un tissu? Et comment vérifier que l'on a isoler la bonne séquence?
Je pensais à isoler la séquence en utilisant une banque d'ADN génomique et vérifier que la séquence isolée est la bonne en fusionnant un gène rapporteur (qui coderait pour la protéine GFP, par exemple) et d'en vérifier l'expression dans le tissu en question...
Est-ce que je suis sur la bonne voie? J'ai beau chercher sur le net ou dans des livres, je ne trouve pas de réponse précise...
Merci de votre aide
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! En premier lieu, je suppose que tu compte isoler ta séquence depuis une banque d'ADN génomique par PCR...?Dans ce cas, une fois ta séquence amplifiée, un séquençage est la première chose à faire. En effet, dans le cas où tu n'isole pas la bonne séquence, la fusion avec un gène rapporteur peut te donner un résultat faux-positif (ou faux-négatif si un problème survient pendant la réalisation de la construction). Le séquençage permet donc de s'en assurer. Si l'expression tissu-spécifique de la protéine dépend de cette séquence, alors la construction hétérologue est un bon moyen de savoir si ton isolement est correct et si la séquence régulatrice isolée est intègre : transfection dans une lignée cellulaire appartenant au tissu d'intérêt et une autre dans une lignée cellulaire n'y appartenant pas.