séparation des leucocytes à partir du sang de boeuf

[invite802886a4]

Bonjour,
j'ai quelques petits points non claires concernant mon tp portant sur la séparation des leucocytes à partir d'un sang de boeuf,on a mélangé 5 ml de sang avec 3 ml de glycérol (pourquoi?),d'aprés mes connaiscences il joue le rôle d'anti-coagulant et sert à séparer les leucocytes (je sais pas si c'est juste ou pas),ensuite on procéde à une centrifugation à 200rpm pendants 10min,on résupère l'anneau de leucocytes puis on laves avec du PBS NH4CL (quel est son rôle?) je ne sais pas si c'est parceque c'est un sel donc il va lyser les GR par éclatement de ces cellules ou alors il a un autre rôle?
une deuxième centri est réalisée pour éliminer les debrits des GR mortes qui constituent le surnageant puis on récupère le culot et on dépose une goutte sur une lame puis on recouvre avec de l'éthanol 90° (pourquoi?) .
voila,j'éspère trouver des réponses,je vous remercis.
à bientot.
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[invitede7836e3]

salut

le glycérol agit sur les globules rouges par un mécanisme que je connais pas mais c'est pas un anticoagulant.
le PBS sert surtout à rincer les cellules, il ne les fait pas eclater puisque c'est une solution isotonique (même concentration en sels que le corps humain).
l'ethanol sert à fixer le frotis sur la lame.

[invite802886a4]

bonsoir,
dabord merci a leila,ms je souhaiterai rajouter un truk on est d'acord pour le pbs ms le NH4Cl quel est son rôle la dedans?
Concernant le mécanisme du glycérol avez vous un liens qui pourrai m'en dire plus? car dans notre tp on l'a mis à la place du ficcol.
voila,merci d'avance.a+

[inviteb6144ea4]

Bonsoir,

Concernant le mécanisme du glycérol avez vous un liens qui pourrai m'en dire plus? car dans notre tp on l'a mis à la place du ficcol.

Le glycérol ou le ficoll sert à séparer les différents constituants du sang grâce à la centrifugation. Cette technique repose sur les densités du glycérol et des cellules sanguines qui sont différentes. Après centrifugation, suivant un gradient de densité, le plasma se retrouve en "haut" du tube puis à l'interface avec le glycérol se trouve les leucocytes, arrive ensuite le glycérol et enfin tout au fond du tube on y trouve les hématies.

Cordialement

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite802886a4]

bonsoir
c'est ce que je pensais;
merci

[invitede7836e3]

je vous en prie
le NH4CL permet la lyse des globules rouges.
voici un site ou j'ai trouvé ceci
http://www.freepatentsonline.com/EP0955543.html

[invite802886a4]

je vous en prie
le NH4CL permet la lyse des globules rouges.
voici un site ou j'ai trouvé ceci
http://www.freepatentsonline.com/EP0955543.html

merci infinniment.bonne soirée.