Bonjour, j'ai un peu de mal à comprendre le séquençage des acides nucléiques."methode de sanger".j'aimerai bien avoir une petite explication.merci.
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29/04/2009, 15h47
#2
inviteb6144ea4
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Re : génie génétique
Bonjour,
peux-tu nous dire ce que tu as compris? Quels sont les points qui te posent problème?
En l'état actuel des choses, nous ne ferons rien de plus que "recracher" un cours que tu as certainement du déjà avoir ou une page wikipedia.
Cordialement
29/04/2009, 15h52
#3
inviteb8d46e20
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Re : génie génétique
j'aimerai comprendre la methode de sanger pour pouvoir résoudre mes exercices
30/04/2009, 10h57
#4
inviteb6144ea4
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Re : génie génétique
Bonjour,
pour résumer:
Cette technique consiste en la synthèse d'un brin complémentaire du brin dont la séquence est à déterminer dans quatre conditions différentes. Ces conditions regroupent les élements necessaires à la synthèse (dNTP, amorce, polymérase...) + un ddNTP différents pour chacune d'entre elles (d'où quatre milieux différents: avec ddATP, ddGTP, ddCTP et ddTTP)
Un ddNTP est un didésoxynucléotide, c'est à dire qu'il n'a plus de groupement OH en 2' et 3', donc, lorsqu'il est incorporé dans la séquence la synthèse s'arrête.
Le but de la manoeuvre est de mettre le ddNTP en faible quantité dans le milieu afin d'avoir une insertion aléatoire. Ainsi on n'obtiendra tous les brins complémentaires possibles.
Enfin, grâce à une électrophorèse, il suffit de faire migrer les brins obtenus (4 puits, pour les 4 milieux) et il n'y a plus qu'à "lire" la séquence.