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probléme de migration d'ADN sur gel d'agarose



  1. #1
    Timetomove

    Question probléme de migration d'ADN sur gel d'agarose


    ------

    Bonjour,
    Je vous écris car j'ai un problème récurent lors de la migration d'ADN à la suite d'une PCR.
    De l'ADN a été extrait à partir de pulpe de tomate et ensuite stocké au congélateur.Je pars donc ensuite de cette extraction (2microlitres) que j'ajoute à 48 microlitres d'une solution contenant de l'eau, un tampon, des bases nucléotidiques, les primers REVERSES et FORWARD ainsi que la TAQ polymérase.Ensuite on lance la PCR pour 40 cycles.
    A son issue, on regarde les résultats sur gel d'agarose(+Bromure d'éthidium).Le témoin négatif(2microlitres d'eau à la place de l'ADN) est bien négatif, le témoin positif(ADN de feuille de tomate dont on est sur qu'il s'hybride) est bien positif.Le problème survient sur notre échantillon : en effet, le l'ADN ne sort pas des puits.Ceci est survenue avec 2 variétés de tomate différente!
    De quoi cela peut-il venir?Je serais très reconnaissant que quelqu'un m'aide!

    -----

  2. #2
    Yoyo

    Re : probléme de migration d'ADN sur gel d'agarose

    Salut

    Te serait-il possible de poster un scan de tes gels? c'est toujours plus simple pour se rendre compte.
    En général ce qui reste dans les puits sont des debris cellulaires...Quelle taille doit faire ton produit de PCR?

    YOYo

  3. #3
    bensouk

    Re : probléme de migration d'ADN sur gel d'agarose

    Peut etre que tu n'a tout simplement rien amplifié et que c'est l'ADN génomique n'est pas sorti du puit... Essaye d'autres primers sur ta solution d'ADN pour voir si autre chose peu etre amplifié et ainsi migrer correctement dans ton gel.

  4. #4
    jmbowie

    Re : probléme de migration d'ADN sur gel d'agarose

    Citation Envoyé par bensouk Voir le message
    Peut etre que tu n'a tout simplement rien amplifié et que c'est l'ADN génomique n'est pas sorti du puit... Essaye d'autres primers sur ta solution d'ADN pour voir si autre chose peu etre amplifié et ainsi migrer correctement dans ton gel.
    Essaie aussi de diminuer la quantité d'ADN de ton échantillon? Vous l'avez dosé pour vérifier que vous être dans le même ordre de grandeur que le témoin positif ?
    Blast up your life!

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