hypothése et solution pour une probléme d'immunomarquage

[invite4ff9937a]

Bonjour,

Je cherche à faire des immuno-marquages sur des coupes de rate humaine. Parmis tout les anti-corps que j'ai testé j'observe une certaine variabilité quand à leur fonctionnement.
Tout les anticorps que j'utilise sont connu comme marchant sur coupe congelé à l'OCT, déja utilisé dans des papiers...Pourtant certaint ne marche absolument pas! (les ligand sont là c'est sur!!)

Parmis les hypothèses expliquant celà, nous pensons que certain des ligands que nous cherchons à marqué à la surface des cellules sont peut-être "masqué" par des sucres ou autre modifications post-traductionelles....

Que pensez-vous de cette explication? Que pourrai-je faire pour "décaper" mes ligands de toute ces modifications post-traductionnelle?

Merci pour vos réponse

cordialement
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[invite71f23525]

Bonjour,

As-tu essayé différents anticorps dirigés contre le même ligand (ce sont des facteurs de croissance je suppose...)? Car certains anticorps marchent bien en western mais mal en IF ou IHC, pour d'autres c'est l'inverse. Seule l'expérience le dit.

Greg

[invite4ff9937a]

Salut,

Non pas de facteur de croissance dans l'histoire, des antigénes membranaire commun au Lb plutôt...

Oui j'ai essayé different clone par ex pour CD38 mais aucun ne marche alors que les fabricant nous disent le contraire et certaine publi ont eu des bon marquages avec.....

reste toujours la possibilité que je sois nul mais dans ce cas faut m'expliquer pourquoi je le suis qu'avec certain Ac..lol

cordialement

[invite71f23525]

Dans le cas où ta méthode a été validé par une autre équipe et publiée avec ces anticorps là, il ne faut pas hésiter à écrire à ces équipes pour connaitre leurs conditions expérimentales. Tu met ton directeur de recherche en copie visible pour mettre du poids à ton mail et normalement ils devraient te répondre.

Greg

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite4ff9937a]

Salut

MERCI LXR pour les réponses

cordialement

[invitea5f821f6]

Bonjour,

Je cherche à faire des immuno-marquages sur des coupes de rate humaine. Parmis tout les anti-corps que j'ai testé j'observe une certaine variabilité quand à leur fonctionnement.
Tout les anticorps que j'utilise sont connu comme marchant sur coupe congelé à l'OCT, déja utilisé dans des papiers...Pourtant certaint ne marche absolument pas! (les ligand sont là c'est sur!!)

Parmis les hypothèses expliquant celà, nous pensons que certain des ligands que nous cherchons à marqué à la surface des cellules sont peut-être "masqué" par des sucres ou autre modifications post-traductionelles....

Que pensez-vous de cette explication? Que pourrai-je faire pour "décaper" mes ligands de toute ces modifications post-traductionnelle?

Merci pour vos réponse

cordialement

je pense qu il faut travaillez avec un PH9