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Exprimer une protéine fonctionnelle en plasmide




  1. #1
    Istria

    Question Exprimer une protéine fonctionnelle en plasmide

    Je désire insérer un cDNA dans un plasmide sous contrôle d’un promoteur CMV pour exprimer cette protéine.

    Pour m’assurer que ma protéine est fonctionnelle je dois insérer la séquence de mon cDNA du codon ATG au codon stop… jusque là ok !

    Mais, dois-je aussi inclure l’exon qui précède mon codon ATG ? Et surtout dois-je inclure l’exon qui suit mon codon stop et si oui en partie ou totalement ?

    -----


  2. Publicité
  3. #2
    Yoyo

    Re : Exprimer une protéine fonctionnelle en plasmide

    salut

    Ca depend principalement de la taille de tes exons / introns.
    Il semble que la présence d'un intron favorise une bonne expression dans certains cas. D'un autre coté ca peut poser d'autre probleme lors d'une surexpression. En général on clone un cDNA, maintenant si les tailles sont compatibles on peut cloner l'ADN avec ses introns.

    YOyo

  4. #3
    Istria

    Re : Exprimer une protéine fonctionnelle en plasmide

    Pour la taille l’DNA fait un peu plus 6000pb donc je préfèrerai utiliser le cDNA (1500pb), j’ai besoin d’un rendement correct et non optimalisé …( par contre je ne savais pas que des études traitaient de ce sujet … je vais consulter…)

    Mais surtout ma question est d’un ordre théorique que je me posais est ce que je suis « obligée » de cloner toute la séquence du cDNA ou juste la séquence entre ATG et mon STOP.


  5. #4
    Petrucci

    Re : Exprimer une protéine fonctionnelle en plasmide

    Mais en fait il provient d'où ton ADN, parce que est ce qu'un ADN humain par exemple pourra bien s'exprimer dans une bactérie ? Autrement dit, est ce que la bactérie possède les éléments necessaires pour épisser un gène d'origine différente que le génome bactérien ?

    Mais seul le cDNA suffit à exprimer la protéine nan ? En considérant biensur que le promoteur soit déjà dans le plasmide ? Parce que en fait je ne comprends pas bien l'histoire de l'intron avant l'ATG ?

  6. #5
    Yoyo

    Re : Exprimer une protéine fonctionnelle en plasmide

    Citation Envoyé par Istria Voir le message
    Mais surtout ma question est d’un ordre théorique que je me posais est ce que je suis « obligée » de cloner toute la séquence du cDNA ou juste la séquence entre ATG et mon STOP.
    d'un point de vue théorique il te suffit de cloner ta phase ouverte (ATG-> STOP).

    Citation Envoyé par Petrucci Voir le message
    Mais en fait il provient d'où ton ADN, parce que est ce qu'un ADN humain par exemple pourra bien s'exprimer dans une bactérie ? Autrement dit, est ce que la bactérie possède les éléments necessaires pour épisser un gène d'origine différente que le génome bactérien ?
    Il ne veut pas l'exprimer dans une bactérie puisqu'il précise qu'il clone son gene sous control du promoteur CMV qui est un promoteur viral eucaryote

    YOyo

  7. A voir en vidéo sur Futura

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