Bonjour a tous,
On ce pose une question dans notre equipe, un etudiant utilise un siRNA clone dans un vecteur lentiviral, il transfecte les 293T, recolte le surnageant et transduit des cellules endotheliales.
Il utilise 2 controles, l'un represente par les cellules non transduites, l'autre par des cellules transduites avec le lentivirus portant la sequence scramble (dont a priori pas d'effet).
Lorsqu'il suit la proliferation, migration des cellules il constate que les cellules transduites avec le scramble repondent plus que les normales (alors qu'elle devraient etre au meme niveau), les cellules transduites avec le siRNA suppose etre efficace, presnete un niveau identique ou proche de celui des cellules n'ayant rien recu.
Si c'etait que ca, on pourrait se dire ok le gene en question n'a probablement aucun effet ni sur la proliferation ni sur la migration.
But, le hic c'est que voulant a tout prix colle aux donnees deja publiees, il s'est attache a modifier les conditions de culture.
Au lieu de maintenir les cellules dans du MEM119 + 10% FBS +tout le cocktail de cytokines approprie, il a utilise du MEM119 + 4% FBS sans rien d'autre.
Pourquoi 4% on sait pas trop, il dit que 2% les cellules mouraient alors il a juste double...
Toujours est-il que dans ces conditions il trouve des donnees qui sont plus en accrod avec les publi.
Je dirais que ces resultats sont un peu tires par les cheveux, aprce que les cellules sont mises dans des conditions ''extremes'', en tout cas eloignees des conditions normales.
Que pensez-vous de tout ca ?
Auriez-vous des suggestions/explications a propos des differences entre les 2 controles.
Merci plein de fois pour votre aide ! Bonne soiree a tous
Sorry pour les accents, mon clavier en est depourvu.
Bodum
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