Rôle des réactifs de la PCR

[inviteb7a2bf9a]

Bonjour a tout le monde !

Voila je suis en BTS Anabiotec et dans une semaine je vais passer le plus gros examen du BTS (examen pratique où l'on me posera des question d'ordre théorique).

Je suis donc en trin de réviser ma biologie moléculaire et j'aimerais savoir à quoi servent tout les réactifs utilisés, à savoir :

- un tampon microprep composé de :
* sorbitol
* tris base
* EDTA

- un mélange chloroforme / alcool isoamylique 24:1

- de l'éthanol 70%

- de l'isopropanol

- du mélange Tris 10mM - EDTA 1mM

Voila merci d'avance de votre aide
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[invite4bded444]

Euh t'es sur que c'est pour la PCR tout ca ????

[inviteb7a2bf9a]

Euh t'es sur que c'est pour la PCR tout ca ????

Oui oui tout ca c'est pour la PCR !! Fin c'est pour l'extraction de l'ADN pour réaliser ensuite la PCR...c'est vrai que c'est pas tout à fait pareil. Oui donc voila je désire réaliser l'extraction de l'ADN DE FEUILLES DE maïs et j'utilise tout ces réactifs mais je ne sais pas à quoi servent chacuns exactement

[invitef08e6467]

En effet il s'agit de réactifs pour une extraction et non une PCR....

Je ne suis pas un expert mais tes réactifs EDTA tris, vont permettre la lyse des membranes et parois.

Les alcools éthanol et isopropanol vont te permettre de précipiter la molécule d'ADN afin de la purifier ensuite en filtrant ou sur colonne... Cela mérite d'approfondir mais tu as les fonctions des produits dans les grandes lignes.

Moila.

[A voir en vidéo sur Futura]

[inviteb7a2bf9a]

En effet il s'agit de réactifs pour une extraction et non une PCR....

Je ne suis pas un expert mais tes réactifs EDTA tris, vont permettre la lyse des membranes et parois.

Les alcools éthanol et isopropanol vont te permettre de précipiter la molécule d'ADN afin de la purifier ensuite en filtrant ou sur colonne... Cela mérite d'approfondir mais tu as les fonctions des produits dans les grandes lignes.

Moila.

Ah ok !!
Heu j'avais appris que l'EDTA est un complexant qui piégeait le calcium et le magnésium dans un autre TP. Ici il servirait donc a lyser les membranes et les parois?

Merci beaucoup de ta réponse

[invitef08e6467]

Ouai, après renseignement auprès de mes collègues Biomoleux, L'EDTA sert à inhiber les nucléases par réaction avec le Mg++.
Le tris sert de tampon, le chloroforme est un solvant... Voila j'espère que tu y vois plus clair.

En revanche pour le sorbitol j'ai du mal à voir...

[inviteb7a2bf9a]

Ouai, après renseignement auprès de mes collègues Biomoleux, L'EDTA sert à inhiber les nucléases par réaction avec le Mg++.
Le tris sert de tampon, le chloroforme est un solvant... Voila j'espère que tu y vois plus clair.

En revanche pour le sorbitol j'ai du mal à voir...

Oui !! Merci beaucoup pour ta précieuse aide !!
J'ai mon examen pratique demain et je pense que tout celà peut m'être d'une grande aide !!

Merci