Qiagen RNeasy trizol

[invite08d5b830]

Bonjour,
J'utilise pour mes extractions d'ARN les colonnes RNeasy du kit Mini de qiagen, après lyse dans leur tampon RLT. Ce kit est prévu pour des petites quantités de matériel.
Je souhaite lyser un ganglion entier, que j'ai conservé en cryotube. J'ai cru comprendre que la lyse au trizol était beaucoup plus efficace. De plus, pour lyser le ganglion dans du RLT si je respecte les volumes du protocole qiagen, je dois y passer 1/4 de mon kit.

J'ai trouvé un protocole d'extraction sur rneasy apres lyse trizol, et j'aurai voulu savoir si il y avait un risque de contamination des ARN par le trizol, ou bien si il est parfaitement lavé. On m'avait mis en garde un jour sur l'extraction au trizol, car cela serait assez fastidieux. (on parle souvent de contamination aux phénols).

J'extrais pour faire des microarrays et pcrq derriere.

De plus, j'aurai voulu avoir une estimation du prix du trizol?
Merci d'avance,
Cordialement,
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[invite71f23525]

Bonjour,

La même situation est rencontrée dans l'équipe où je travaille. Pour ma part je fais des extractions d'ARN sur des cellules avec le kit RNA easy Blood kit et ça marche super bien. D'autres travaillent sur des tissus de souris et pour extraire les ARNs ce kit n'a rien donné de bon. Donc pour eux c'est l'extraction au Trizol qui marche bien. Il faut juste faire attention lorsque l'on prélève les ARNs de ne pas contaminer avec la phase intermédiaire contenant les protéines et l'ADN. Après en dosant les ARN, grâce au rapport 260/280 tu sais si tu as des contaminations protéiques, grâce au rapport 260/230 tu sais si tu as une contamination phénolique. Pour le prix du trizol, je t'invite à aller sur les sites des fournisseurs de consommables de laboratoire de biochimie, le trizol n'est pas un produit rare.

Greg

[inviteea23feb0]

Salut
Je confirme, en ce qui me concerne l'extraction au Trizol a toujours fonctionné même en changeant de tissus (j'ai travaillé sur des tissus d'animaux, plantes et champignons...) sachant que j'avais pas recours à des kit et j'arrive à visualiser des RNA nickels... Y a une méthode pour préparer le Trizol au labo si vous avez beaucoup de matière première à partir de laquelle vous allez faire vos extractions et c'est beaucoup moins cher qu'acheter le Trizol commercialisé en solution.
Mes rapports 260/280 sont au alentours de 1,5 et 2,1 (pour mes extractions).

Le Trizol est le meilleur ami de l'ARN...
Bonne chance.

[invitea069fc56]

Il est peut-etre un peu tard pour la réponse mais bon, je réponds quand meme !
En général, l'extraction avec le Trizol => bon rendement, qualité moindre..
extarction avec RNeasy=> moins de rendement, qualité "meilleure" !
Ceci dit, avec le trizol, on peut aussi avoir de bon qualité en purifiant les RNA sur colonne après extraction par le trizol (si la propreté n'est pas suffisante)

[A voir en vidéo sur Futura]