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Maxiprep



  1. #1
    Bacillus 100

    Maxiprep


    ------

    Bonjour,
    j'ai réalisé une maxiprep à partir d'une culture qui à servis à faire une miniprep.
    Pour la miniprep très bien, le vecteur est en bonne état j'ai les 3 formes par contre pour la maxiprep après dépôt sur gel je m'aperçois que le vecteur est dégradé j'ai une bande en haut du gel rien à voir avec une bonne maxiprep
    Moi je pense à l'étape final ,j'ai peut être fait une erreur que je fais pas d'habitude ,c'est la resuspension j'ai vraiment insisté sur la resuspension peut être ai-je cassé mécaniquement mon plasmide.
    Qu'en pensez vous?

    Indication:
    Le kit que j'ai utilisé c'est celui de machery nalgel

    -----

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  3. #2
    jmbowie

    Re : Maxiprep

    Citation Envoyé par Bacillus 100 Voir le message
    Bonjour,
    j'ai réalisé une maxiprep à partir d'une culture qui à servis à faire une miniprep.
    Pour la miniprep très bien, le vecteur est en bonne état j'ai les 3 formes par contre pour la maxiprep après dépôt sur gel je m'aperçois que le vecteur est dégradé j'ai une bande en haut du gel rien à voir avec une bonne maxiprep
    Moi je pense à l'étape final ,j'ai peut être fait une erreur que je fais pas d'habitude ,c'est la resuspension j'ai vraiment insisté sur la resuspension peut être ai-je cassé mécaniquement mon plasmide.
    Qu'en pensez vous?

    Indication:
    Le kit que j'ai utilisé c'est celui de machery nalgel

    Je connais un peu ce kit, il donne d'excellents rendements. As tu vérifié que tu pouvais pas obtenir une quantité suffisante d'ADN avec une miniprep ?
    Blast up your life!

  4. #3
    Bacillus 100

    Re : Maxiprep

    Pour la miniprep il n'y a pas de soucis. Le soucis est avec la maxiprep ou j'ai une concentration de l'ordre de 500ng/µl ce qui est normale par contre ce qui est pas normale c'est lorsque je dépose ma maxiprep pour vérifier la qualité et là problème!! j'ai une bande en haut du gel c'est peut être de l'ADN gémomique et je n'ai pas de plasmide par contre

  5. #4
    Bacillus 100

    Re : Maxiprep

    Faire une transfection à partir d'une miniprep c'est recommandé? Je pourrais faire plusieurs miniprep ensuite les précipiter avec l'isopropanol? qu'en pensez-vous?

  6. #5
    Bacillus 100

    Re : Maxiprep

    Je reformule ma question car ce n'est pas trés clair.
    Puis-je transfecter à partir d'une miniprep sachant que j'ai une concentration suffisante?
    Peut être qu'en miniprep c'est un peu trop sale non?

    Merci pour vos réponses

  7. A voir en vidéo sur Futura
  8. #6
    LXR

    Re : Maxiprep

    Bonjour,

    Bien entendu que tu peux transfecter à partir d'une miniprep d'ADN, la seule différence entre mini, midi et maxiprep c'est la capacité des colonnes à purifier une quantité d'ADN de plus en plus grande, dans l'ordre que j'ai cité. Par contre si tu as déposé une trop grande quantité d'ADN sur ta colonne miniprep, peut-être il peut y avoir un problème de pureté. Si tu as suivi les instructions du fournisseur, il n'y a aucun souci.

    Greg

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  10. #7
    Bacillus 100

    Re : Maxiprep

    Super merci beaucoup!

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