Maxiprep

[inviteec077029]

Bonjour,
j'ai réalisé une maxiprep à partir d'une culture qui à servis à faire une miniprep.
Pour la miniprep très bien, le vecteur est en bonne état j'ai les 3 formes par contre pour la maxiprep après dépôt sur gel je m'aperçois que le vecteur est dégradé j'ai une bande en haut du gel rien à voir avec une bonne maxiprep
Moi je pense à l'étape final ,j'ai peut être fait une erreur que je fais pas d'habitude ,c'est la resuspension j'ai vraiment insisté sur la resuspension peut être ai-je cassé mécaniquement mon plasmide.
Qu'en pensez vous?

Indication:
Le kit que j'ai utilisé c'est celui de machery nalgel
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[invitee863e61a]

Bonjour,
j'ai réalisé une maxiprep à partir d'une culture qui à servis à faire une miniprep.
Pour la miniprep très bien, le vecteur est en bonne état j'ai les 3 formes par contre pour la maxiprep après dépôt sur gel je m'aperçois que le vecteur est dégradé j'ai une bande en haut du gel rien à voir avec une bonne maxiprep
Moi je pense à l'étape final ,j'ai peut être fait une erreur que je fais pas d'habitude ,c'est la resuspension j'ai vraiment insisté sur la resuspension peut être ai-je cassé mécaniquement mon plasmide.
Qu'en pensez vous?

Indication:
Le kit que j'ai utilisé c'est celui de machery nalgel

Je connais un peu ce kit, il donne d'excellents rendements. As tu vérifié que tu pouvais pas obtenir une quantité suffisante d'ADN avec une miniprep ?

[inviteec077029]

Pour la miniprep il n'y a pas de soucis. Le soucis est avec la maxiprep ou j'ai une concentration de l'ordre de 500ng/µl ce qui est normale par contre ce qui est pas normale c'est lorsque je dépose ma maxiprep pour vérifier la qualité et là problème!! j'ai une bande en haut du gel c'est peut être de l'ADN gémomique et je n'ai pas de plasmide par contre

[inviteec077029]

Faire une transfection à partir d'une miniprep c'est recommandé? Je pourrais faire plusieurs miniprep ensuite les précipiter avec l'isopropanol? qu'en pensez-vous?

[A voir en vidéo sur Futura]

[inviteec077029]

Je reformule ma question car ce n'est pas trés clair.
Puis-je transfecter à partir d'une miniprep sachant que j'ai une concentration suffisante?
Peut être qu'en miniprep c'est un peu trop sale non?

Merci pour vos réponses

[invite71f23525]

Bonjour,

Bien entendu que tu peux transfecter à partir d'une miniprep d'ADN, la seule différence entre mini, midi et maxiprep c'est la capacité des colonnes à purifier une quantité d'ADN de plus en plus grande, dans l'ordre que j'ai cité. Par contre si tu as déposé une trop grande quantité d'ADN sur ta colonne miniprep, peut-être il peut y avoir un problème de pureté. Si tu as suivi les instructions du fournisseur, il n'y a aucun souci.

Greg

[inviteec077029]

Super merci beaucoup!