HT-29 où Caco-2, que choisir?

[invite899b80e1]

Bonjour, je suis microbiologiste à la base et la biologie cellulaire me pose quelques problèmes, je vous explique mon problème :
J’aimerai tester le potentiel de certaines bactéries à adhérer au tractus digestif. J’ai donc regardé les différents modèles cellulaires existant pour traité ce type de question et il s’avère que les deux lignées cellulaires utilisées dans la littérature sont les HT-29 et les Caco-2. Pour des raisons de budget je ne pourrais tester qu’un seul de ces deux modèles. Cependant je ne sais pas quel modèle choisir ! Certes il existe des différences phénotypiques entre ces deux lignées cellulaires mais je ne sais pas comment justifié pourquoi utilisé tel ou tel lignée. Bref j’aimerais connaitre l’avis de personne ayant déjà utilisé ces lignées cellulaires.
Merci d’avance pour votre aide !
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[invite4fea9b62]

Bon j'ai vu que ton post ne déchaîne pas les foules.

Vu que j'ai déjà utilisé la lignée HT29, je me permet ces quelques lignes.

C'est une lignée issue d'un cancer colorectal, plus précisément un carcinome, donc ce sont théoriquement des cellules épithéliales.
Cela semble correspondre à ce que tu cherches, mais méfie-toi elles sont ultra hétérogènes et peu stables ; au bout quelques semaines de culture elle exprime des caractéristiques de différenciation qui ne sont pas celles des cellules épithéliales (goblet cells notament).

Pour répondre un tout petit peu à ta question, le choix des ces cellules est criticable en terme d'interactions membranaires...

[invite899b80e1]

Tout d'abord merci de ta réponse.
Comme je vois que tu connais bien ette lignée cellulaire, je me permet de te poser une autre question: comment sait tu si ton "monolayer" est différencié? (il existe probablement des kits mais en as tu un à me conseiller?).
Dans un second temps j'ai cru comprendre que ces cellules produisent du mucus es vraiment le cas (en combien de temps cette couche apparait)? cela expliquerai peu etre les interactions menbranaires avec ces cellules soit criticable.

cordialement,

[invite4fea9b62]

Je suis désolé je ne pourrais pas te répondre pour le mucus.
Je ne l'ai jamais observé.

Par contre on peut observer les caractéristiques de différenciation par simple analyse morphologique, western blot, ou par cytométrie de flux.

Je suis désolé de ne pas pouvoir t'aider plus.

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite899b80e1]

Ne t'en fait pas tu m'as deja bien aider car je suis un vrai novice dans ce domaine! Si cela ne te dérange pas pourrais tu me fournir ton matériel et méthode concernant la culture de cette lignée, j'aimerai voir comment cela se passe dans la vrai vie, car dans les articles ce n'est généralement presque pas détaillé (car travaux de routine j'imagine).

Merci pour ton aide !

[invite98839ab8]

Salut stonekiller,

une partie de l'équipe dans laquelle je travaille bosse sur l'adhésion dune bactérie commensale intestinale. Et au labo on a accès au caco et aux HT. De ce que je me souviens des réunions labo les HT mettent 2 semaines pour se différencier et commencer à secréter le mucus. D'ailleurs le mucus peut ne pas être un problème car certaine bactérie ont la capacité à y adhérer. Tout dépend de ton axe de recherche... Si tu as besoin de plus d'info j'irai voir les personnes qui bossent la dessus

[invite899b80e1]

Salut wishangel,

Tout d'abord merci de ta réponse. En effet certaines bactéries adhérent très bien aux mucus notament grace à leur "mucus binding protein". Mon axe de recherche consiste à tester quleques souches pour leur capacité à adhérer soit aux caco-2 soit aux HT-29. Après ce premier screening il s'agira de tester les meilleurs souches in vivo (sur animaux et cellules) afin de visuliser la communication entre ces souches adérentes et l'hotes. La secretion de mucus est l'un de ces paramètres, puisque, dans l'idéal je souhaiterai étudier la relation qu'il peux exister entre capacité d'adhesion et synthèse de mucus.
Dans cette optique, je pense que les HT 29 représente mieux la réalité que les caco-2 mais certaines études aont également montré une surexpression des gènes codant pour le mucus chez les caco-2 (sans données aux niveau synthèse protéique).

[invite71f23525]

Vu ton dernier message il n'y a pas à hésiter. Une surexpression des gènes impliqués dans la production de mucus au niveau de l'ARNm ne veut rien dire au niveau fonctionnel, c'est à dire au niveau de la production effective de mucus. Avec les HT-29 tu sembles donc être avec un outil concret où la production de mucus est bien montrée.

Greg

[invite899b80e1]

Bonjour LXR,
C'est vrai que tu n'as pas tord, d'un point de vue physiologique. Je n’avais pas assez de recule et je n’ai même pas vue ce détail pourtant très important ! Merci pour tes conseils et bonne journée !