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Purification d'un plasmide à partir de cellules mammifères??



  1. #1
    Delphinette

    Purification d'un plasmide à partir de cellules mammifères??

    Bonjour
    Pensez-vous qu'il soit possible d'isoler et purifier un plasmide (EBV = pas d'intégration et expression à long terme sous sélection) à partir de mes lignées cellulaires transfectées?....
    Quelqu'un a-t-il déjà fait une manip de ce genre? Si oui des conseils seront les bienvenus!

    -----


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  3. #2
    LXR

    Re : Purification d'un plasmide à partir de cellules mammifères??

    Essayes de faire une miniprep sur tes cellules, comme on le fait pour les bactéries. Le problème est que les tampons risquent de ne pas être adapté pour cette situation et rien donner comme production. Je ne vois que cette solution en tout cas car les extractions d'ADN classique ne séparerons pas le plasmide de l'ADN génomique alors que les kit mini-, midi- et maxiprep le permettent...pour les bactéries.

    Si tu essayes, tiens nous au courant du résultat.

    Greg

  4. #3
    Flyingbike

    Re : Purification d'un plasmide à partir de cellules mammifères??

    pas mieux que LXR mais juste par curiosité : pourquoi vouloir isoler un plasmide de cellules transfectées ?

  5. #4
    Delphinette

    Re : Purification d'un plasmide à partir de cellules mammifères??

    Merci des conseils je ne sais pas si je vais le faire tout de suite mais si j'essaie je vous tiendrai au courant. En fait mon idée serait de faire une sorte de criblage car en gros je complémente un phénotype de blocage du cycle en transfèctant certains micro-ARNs et je me dis qu'en transfectant un pool de micro-ARNs (exprimés via ce plasmide) je pourrai récupérer les clones qui poussent et alors regarder quel(s) micro-ARN(s) a favorisé la prolif... Bref cela reste au stade de l'idée pour l'instant.

  6. #5
    Kucing

    Re : Purification d'un plasmide à partir de cellules mammifères??

    Bonjour,

    Il existe une technique mise au point en 1967 :
    http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/4...ubmed_RVDocSum

    Voici un article de 1991 en accès libre qui détaille une modification du protocole de Hirt:
    http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/1...?dopt=Abstract

    Sinon, une recherche dans Google avec "Hirt" "supernatant" et "protocole" devrait faire ton bonheur.

  7. A voir en vidéo sur Futura

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