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Purification de plasmide en HPLC



  1. #1
    chloe34

    Purification de plasmide en HPLC


    ------

    Bonjour,
    J'ai appri récemment qu'il était possible de purifier des plasmides en HPLC sur colonne échangeuse d'ions.
    Je voudrais savoir si quelqun à déjà fait ça et si il pourrait m'aider pour réaliser cette manip.
    Je souhaiterais obtenir une grande quantité de plasmide assez pure sans passer par les maxi-preps.
    Merci à tous pour vos précieux renseignements.

    -----

  2. #2
    Zellus

    Re : Purification de plasmide en HPLC

    Bonsoir,

    Je ne l'ai jamais fait mais on doit pouvoir trouver des solutions .
    En fait, je fais de la purif de protéines par FPLC depuis peu et je peux te dire qu'on peut voir un pic d'absorbance correspondant à l'ADN quand on utilise une échangeuse d'anions. Tu dois donc pouvoir utiliser une échangeuse d'anions pour tes plasmides en passant ton lysat cellulaire, puis en éluant avec un gradient de KCl ou NaCl.
    En cherchant viteuf je suis tombé sur ça pour de la purif sur HPLC. C'est pas une échangeuse d'ions mais ça peut être une autre idée à tester. Tu dois pouvoir trouver d'autres articles (plus récent que le mien ) sur pubmed à ce sujet.

  3. #3
    chloe34

    Re : Purification de plasmide en HPLC

    Merci pour ton aide je vais potasser l'article et voir si ça peut m'aider.
    En fait je ne sais pas si beaucoup de gens font ça car je n'ai pas trouvé beaucoup d'info sur ce cas particulier donc je vais essayer...
    Je reçois une colonne DEAE la semaine prochaine on verra si ça marche...
    La suite au prochain épisode et si d'ici là quelqu'un d'autre à des infos n'hésitez pas...

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