Western blot, question "pratique"

[invite6352a023]

Bonjour,

j'ai un soucis depuis peu. Je fais depuis longtemps des WB et j'avais l'habitude d'incuber mes anticorps sur mes membranes en utilisant les boites de cones vides (c'est propre et jetable). Depuis quelques temps, un changement de politique de tri m'empeche de continuer à faire comme ça, du coup je suis à la recherche d'astuces pratiques et pas chères (je fais une dizaine de blots par semaine) pour que je puisse incuber mes anticorps overnight.

Dans d'anciens labo, j'utilisais un film scellé mais ici nous n'avons pas l'appareil pour sceller...

Bref, c'est un problème "pratique" mais qui peut devenir cher et embêtant à long terme...

Merci d'avance,
Julien
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[Flyingbike]

rebelle toi !

tu peux utiliser n'importe quelle boite qui a la bonne taille, il y a meme des récipients vendus pour ça (VWR par exemple). Tu peux aussi acheter des boites style tupperware, ça ne coute pas tres cher.

[invite6352a023]

Merci pour la réponse.
J'ai déjà parcouru les catalogues VWR et Deutscher sans trouver des boites plastiques de la bonne taille et surtout pas trop cher! 6-10 euros la boite (x10 par semaine, sachant qu'on est 3-4 dans ce cas là) ça reviens vite cher puisque je teste beaucoup d'anticorps différents donc pas question de mélanger!

C'est pour ça que je voulais venir à "la peche aux idées" et surtout "aux astuces"...

[Flyingbike]

pourquoi changer à chaque fois ? j'ai souvent utilisé la même boite et je n'ai pas eu de problèmes de contamination. Ca doit dépendre du plastique mais tu peux te faire une solution de lavage (genre 100mM glycine, 100mM Nacl, 0,2%SDS, pH3)

[A voir en vidéo sur Futura]

[inviteab9fd4ae]

perso j'utilise également des boites plastiques dans lesquelles différents anticorps ont été incubés mais je les lave avant le blocage avec du produit à vaiselle et je rince (très très) abondamment. bon courage

[Yoyo]

Salut

sinon tu peux utiliser des tubes falcon de 50ml. la seule condition est de pouvoir rouler ta membrane sans l'abimer. si elle n'est pas trop grande ca rentre impec

YOyo

[invite10adf645]

Nous on a des boites faites pour ça.
Ca peut paraitre cher mais elles sont dans le labo depuis des années. On les lave à chaque fois (abondemment) à l'eau et on a jamais eu de problèmes.
En plus elles font pile poil la taille des membranes qu'on utilise ce qui permet de limiter au maximum le volume de solution d'anticorps à déposer !

[inviteb94d8e21]

Bonjour,

Nous utilisons des boites en plastique que nous lavons abondamment entre chaque manip.
Reférences w16831 à w16836 (selon la taille) chez Fisher-Bioblock (je n'ai pas d'actions chez eux).

[invite6352a023]

Merci beaucoup pour vos réponses.

J'avais beaucoup d'appréhension sur la réutilisation des boites, en me disant que même si je les rinçais bien c'était peut-etre risqué! Enfin, vous êtes nombreux à me dire le contraire donc j'essaierai ça.

Pour la technique du falcon, je m'en sers de temps en temps quand c'est pour une protéine pour laquelle j'ai déjà fait plein de blot et que je suis sur qu'elle ressorte à la bonne taille. En ce moment je suis plutôt en train de tester de nouveaux anticorps donc c'est peut-etre un peu risqué.

Je vais tester tout ça!
Merci beaucoup