Bulles et microplaques

[vpharmaco]

Bonjour !

Alors voilà mon souci : Je travaille actuellement sur un test de criblage sur une enzyme et la détection se fait par fluorescence. Le problème, c'est que je suis contraint d'utiliser un tampon contenant du TritonX (0,1%). Bref, je me retrouve à la fin avec des bulles... qui faussent en partie la reproductibilité des resultats .

Ma question : est ce que vous connaitriez une méthode sioux, facile à mettre en oeuvre, pour éliminer ces bulles ??? (autre que les percer avec une aiguille ou centrifuger les microplaques)

Merci par avance pour vos suggestions.
Cordialement,
vpharmaco
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[invite71f23525]

Bonsoir,

Une aiguille est source de contamination, et à part la centrifugation, je ne vois rien d'autre pour éliminer les bulles (l'un des pires ennemis en labo de biologie!).

Greg

[Zellus]

Bonsoir,

Le DMSO réduit la formation de bulles il me semble mais ce n'est peut-être pas possible d'en utiliser dans ton cas.
Sinon, si tu déposes tout doucement, ça devrait réduire la quantité de bulles, mais c'est un peu long, surtout si tu as plusieurs plaques à remplir ...
Donc la meilleure idée que j'ai là de suite est la suivante : si l'important dans ta manip est la concentration (et pas le volume) dans tes différents puits, tu pourrais peut-être ne pas déposer la totalité du volume que tu as pipeté, en enfonçant le piston de ta pipette que jusqu'au premier cran au lieu du deuxième (responsable généralement de la formation des bulles). Et en plus tu ne perdras presque pas de volume.

[vpharmaco]

Merci pour vos reponses.

@ Zellus : c'est marrant que tu me proposes l'histoire du pipetage car c'est ce que j'ai observé aujourd'hui en fesant ma plaque. J'ai débuté ma plaque en pipetant à fond -> bulles, puis je l'ai fini en m'arretant au premier cran -> absence de bulles !
Le seul souci avec cette methode, c'est qu'il reste un peu de liquide dans le cone et que la reproductibilité des résultats risque de varier un peu en fonction du manipulateur (et de la puissance de son pouce!). Mais, à défaut de trouver une autre méthode, je vais conserver celle-ci.

Attendons quand meme demain pour voir si d'autres forumeurs n'ont pas de recettes de grand-mere biochimiste

NB: je suis déjà à 2% DMSO final .

[A voir en vidéo sur Futura]