Dosage protéine

[invitee603ac10]

Bonjour,

Je travaille sur des BL21 GFP et j'extraie les protéines totales par une simple lyse des bactéries dans deux situations : non induites et induites à l'IPTG. Avant de faire migrer sur polyacrylamide, j'aimerais doser mes protéines pour déposer la même quantité dans tous les puits. J'ai un nanodrop, mais la mesure à 280nm est polluer par la présence d'ADN dans mon échantillon. Je pensais faire une coloration des prot avec le kit BCA mais la lecture se fait à 562nm, or la GFP emet à 504nm. Si elle est "colorée" ca change peut-être la donne mais je ne sait pas trop... Quelqu'un a-t-il déjà testé ? Auriez-vous des infos?
Merci pour vos réponses
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[Flyingbike]

la gfp n'interferera pas je pense. sinon pourquoi pas un bon vieux bradford ?

[invitee603ac10]

Oui, j'avais bien pensé au bradford mais j'ai peur que le tampon de lyse contenant du triton et SDS interfère...

[Flyingbike]

non, le sds et le triton (ainsi que la plupart des produits qu'on peut trouver dans un tampon d'extraction) n'interferent pas avec le bradford.

[A voir en vidéo sur Futura]

[invitee603ac10]

OK merci, je verrai ca ds la semaine.