reactifs utilisés pour l'éxtraction de l'ADN et la PCR

[invite59cd858d]

bonjour
je ne trouve pas le rôle du TE (tris EDTA ) lors de l’extraction de l’ADN génomique de Arabidopsis,
Dans mon protocole on parle aussi de speed-vac comment ça marche et à quoi ça sert

Autre question : on sait que la PCR se déroule en trois temps
dénaturation , hybridation et élongation
les trois phases correspondent à un cycle ,
mais à quoi correspond les étapes 1 et 4 (en gras), et pourquoi ça dure plus longtemps que les autres ?c’est part rapport au fonctionnement du thermocycleur

94°C 5min
94°C 1min
55°C 1min 30cycles
72°C 1min

72°C 7minmerci de m'éclairer
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[piwi]

Le TE c'est du Tampon d'Elution. Une solution saline isotonique qui sert à rediluer et conserver vos ADN une fois que vous les avez extraits. Il est souvent simplement remplacé par de l'eau.

Le Speed Vac est une sorte de centrifugeuse sous vide qui permet d'évaporer rapidement un solvant et de déshydrater ce qui s'y trouve.

Cordialement,
piwi

[Flyingbike]

Alors pour les 94° pendant 5 minutes ça a deux fonctions : bien dénaturer tout l'ADN, et activer la Taq polymérase qui est rendue inactive artificiellement. Ca permet qu'elle commence a etre active uniquement au début du programme.
L'élongation finale a 72° permet de laisser a la Taq le temps de finir tous les produits d'élongation incomplets.

[invite59cd858d]

mes remerciements les plus sincères

[A voir en vidéo sur Futura]